အပင်နှင့် ရောဂါပိုးပစ္စည်းများ
sorghum conversion population (SCP) ဟုလူသိများသော sorghum ဆက်စပ်မှုမြေပုံလူဦးရေကို အီလီနွိုက်တက္ကသိုလ် (ယခု UC Davis တွင်) မှ ဒေါက်တာ Pat Brown မှ ပံ့ပိုးပေးခဲ့သည်။ ၎င်းကို ယခင်က ဖော်ပြခဲ့ပြီးဖြစ်ပြီး အမေရိကန်ပတ်ဝန်းကျင်တွင် အပင်များကြီးထွားဖွံ့ဖြိုးမှုကို အထောက်အကူပြုရန်အတွက် photoperiod-sensitivity နှင့် သေးငယ်သောအရပ်သို့ ပြောင်းလဲထားသော မတူညီသောမျိုးစိတ်များစုစည်းမှုတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤလူဦးရေမှ မျိုးစိတ် ၅၁၀ ကို ဤလေ့လာမှုတွင် အသုံးပြုခဲ့သော်လည်း အပင်ပေါက်မှုညံ့ဖျင်းခြင်းနှင့် အခြားအရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုပြဿနာများကြောင့် ဝိသေသလက္ခဏာသုံးရပ်လုံးကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရာတွင် အသုံးမပြုခဲ့ပါ။ နောက်ဆုံးတွင် chitin တုံ့ပြန်မှုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် မျိုးစိတ် ၃၄၅ ခုမှ အချက်အလက်များကို အသုံးပြုခဲ့ပြီး flg22 တုံ့ပြန်မှုအတွက် ၄၇၂ ခုနှင့် TLS ခံနိုင်ရည်အတွက် ၄၅၆ ခုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ဘီ။ ကွတ်ကီးLSLP18 မျိုးကွဲကို အာကင်ဆောတက္ကသိုလ်မှ ဒေါက်တာ ဘတ် ဘလူးမ်ထံမှ ရရှိခဲ့သည်။
MAMP တုံ့ပြန်မှုတိုင်းတာခြင်း
ဤလေ့လာမှုတွင် flg22 (Genscript catalog# RP19986) နှင့် chitin နှစ်မျိုးကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ စပါးပင်များကို ဖန်လုံအိမ်တွင် မြေဆီလွှာ (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) ဖြင့်ဖြည့်ထားသော ပြားချပ်ချပ်ပေါ်တွင် ခင်းထားသော စိုက်ခင်းများတွင် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ စုဆောင်းသည့်နေ့တွင် အရွက်အစိုဓာတ်အပိုကို ရှောင်ရှားရန် နမူနာစုဆောင်းခြင်းမပြုမီ တစ်ရက်အလိုတွင် အပင်များကို ရေလောင်းခဲ့သည်။
မျိုးစိတ်များကို ကျပန်းရွေးချယ်ခဲ့ပြီး ထောက်ပံ့ပို့ဆောင်ရေးဆိုင်ရာ အကြောင်းပြချက်များကြောင့် မျိုးစိတ် ၆၀ ပါဝင်သော အသုတ်များဖြင့် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ မျိုးစိတ်တစ်ခုစီအတွက် မျိုးစိတ်တစ်ခုလျှင် မျိုးစေ့နှစ်စေ့ဖြင့် 'အိုး' သုံးလုံး စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ လူဦးရေတစ်ခုလုံးကို အကဲဖြတ်ပြီးသည်အထိ ယခင်အသုတ်ကို စီမံဆောင်ရွက်ပြီးသည်နှင့် နောက်ဆက်တွဲအသုတ်များကို စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ မျိုးစိတ်နှစ်ခုလုံးတွင် မျိုးဗီဇများကို ပြန်လည်ကျပန်းရွေးချယ်ထားသော MAMP နှစ်မျိုးလုံးအတွက် စမ်းသပ်မှုနှစ်ကြိမ် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
ROS စမ်းသပ်မှုများကို ယခင်ကဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ အကျဉ်းချုပ်ပြောရလျှင် မျိုးစိတ်တစ်ခုစီအတွက် မျိုးစေ့ခြောက်စေ့ကို အိုး ၃ လုံးတွင် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ ရရှိလာသော ပျိုးပင်များမှ တူညီမှုအပေါ် အခြေခံ၍ သုံးခုကို ရွေးချယ်ခဲ့သည်။ ပုံမှန်မဟုတ်သော သို့မဟုတ် အများစုထက် သိသိသာသာ မြင့်သော သို့မဟုတ် တိုသော ပျိုးပင်များကို အသုံးမပြုခဲ့ပါ။ ၁၅ ရက်သားအရွယ် sorghum အပင်သုံးပင်၏ ၄ ခုမြောက်အရွက်၏ အကျယ်ဆုံးအပိုင်းမှ အချင်း ၃ မီလီမီတာရှိသော အရွက်ပြားလေးချပ်ကို ဖြတ်ထုတ်ခဲ့သည်။ အပင်နှစ်ပင်မှ အရွက်တစ်ရွက်လျှင် ပြားတစ်ပြားနှင့် အပင်တစ်ပင်မှ ပြားနှစ်ပြား၊ ဒုတိယပြားသည် ရေထိန်းချုပ်မှုဖြစ်လာသည် (အောက်တွင်ကြည့်ပါ)။ ပြားများကို အနက်ရောင် ၉၆-well ပြားတွင် 50 µl H20 ပေါ်တွင် အလင်းရောင်မထိတွေ့စေရန် အလူမီနီယံတံဆိပ်ဖြင့် ပိတ်ထားကာ အခန်းအပူချိန်တွင် တစ်ညလုံးသိမ်းဆည်းထားသည်။ နောက်တစ်နေ့နံနက်တွင် ၂ မီလီဂရမ်/မီလီလီတာ chemiluminescent probe L-012 (Wako၊ ကတ်တလောက် # 120-04891)၊ ၂ မီလီဂရမ်/မီလီလီတာ horseradish peroxidase (Type VI-A၊ Sigma-Aldrich၊ ကတ်တလောက် # P6782) နှင့် ၁၀၀ မီလီဂရမ်/မီလီလီတာ Chitin သို့မဟုတ် Flg22 ၂ μM ကို အသုံးပြု၍ တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ဤတုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက် ၅၀ µl ကို တွင်းလေးတွင်းအနက် သုံးခုထဲသို့ ထည့်ခဲ့သည်။ စတုတ္ထတွင်းမှာ MAMP မပါဝင်သော တုံ့ပြန်မှုဖြေရှင်းချက်ကို ထည့်သွင်းသည့် mock control တစ်ခုဖြစ်သည်။ ရေသာပါဝင်သော ဗလာတွင်းလေးတွင်းကိုလည်း ပန်းကန်တစ်ခုစီတွင် ထည့်သွင်းထားသည်။
ဓာတ်ပြုမှုအရည်ထည့်ပြီးနောက်၊ SynergyTM 2 multi-detection microplate reader (BioTek) ကို အသုံးပြု၍ အလင်းဖြာထွက်မှုကို ၁ နာရီကြာ ၂ မိနစ်တိုင်း တိုင်းတာခဲ့သည်။ plate reader သည် ဤ ၁ နာရီအတွင်း ၂ မိနစ်တိုင်း အလင်းဖြာထွက်မှုတိုင်းတာမှုများကို ပြုလုပ်သည်။ ဖတ်ရှုမှု ၃၁ ခုလုံး၏ ပေါင်းလဒ်ကို well တစ်ခုစီအတွက် တန်ဖိုးရရှိရန် တွက်ချက်ခဲ့သည်။ genotype တစ်ခုစီအတွက် MAMP တုံ့ပြန်မှုအတွက် ခန့်မှန်းတန်ဖိုးကို (စမ်းသပ် well သုံးခု၏ ပျမ်းမျှအလင်းဖြာထွက်မှုတန်ဖိုး - mock well တန်ဖိုး) - နုတ်၍ ပျမ်းမျှဗလာ well တန်ဖိုးဖြင့် တွက်ချက်ခဲ့သည်။ ဗလာ well တန်ဖိုးများသည် သုညနှင့် အမြဲတမ်းနီးကပ်နေပါသည်။
အရွက်ပြားများနီကိုတီယာနာ ဘန်သမီယာနာအရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု ရည်ရွယ်ချက်အတွက် ၉၆-well ပန်းကန်တစ်ခုစီတွင် တုံ့ပြန်မှုမြင့်မားသော sorghum မျိုးစိတ်တစ်ခု (SC0003) နှင့် တုံ့ပြန်မှုနိမ့်သော sorghum မျိုးစိတ်တစ်ခု (PI 6069) တို့ကိုလည်း ထိန်းချုပ်မှုများအဖြစ် ထည့်သွင်းထားသည်။
ဘီ။ ကွတ်ကီးကာကွယ်ဆေးပြင်ဆင်ခြင်းနှင့် ထိုးနှံခြင်း
ဘီ။ ကွတ်ကီးကာကွယ်ဆေးကို ယခင်ကဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ အကျဉ်းချုပ်ပြောရလျှင် စပါးစေ့များကို ရေတွင်သုံးရက်စိမ်ပြီး ဆေးကြောကာ ၁ လီတာဆံ့ ဖန်ခွက်များထဲသို့ ခပ်ထည့်ပြီး ၁၅ psi နှင့် ၁၂၁ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် တစ်နာရီကြာ autoclaved လုပ်ခဲ့သည်။ ထို့နောက် စပါးစေ့များကို လတ်ဆတ်သော culture မှရရှိသော macerated mycelia ၅ မီလီလီတာခန့်ဖြင့် ထိုးသွင်းခဲ့သည်။ဘီ။ ကွတ်ကီးLSLP18 ကို သီးခြားခွဲထုတ်ပြီး အခန်းအပူချိန်တွင် ၂ ပတ်ထားကာ ၃ ရက်တစ်ကြိမ် ဘူးများကို လှုပ်ပေးပါသည်။ ၂ ပတ်အကြာတွင် မှိုကျရောက်နေသော စပါးစေ့များကို လေဖြင့်အခြောက်ခံပြီးနောက် လယ်ကွင်းတွင် ကူးစက်သည်အထိ ၄ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် သိမ်းဆည်းထားသည်။ စမ်းသပ်မှုတစ်ခုလုံးအတွက် တူညီသော ပိုးကို အသုံးပြုပြီး နှစ်စဉ်လတ်ဆတ်အောင် ပြုလုပ်သည်။ ကူးစက်ရန်အတွက် ပိုးကျရောက်နေသော စပါးစေ့ ၆-၁၀ စေ့ကို ၄-၅ ပတ်သားအရွယ် စပါးပင်များ၏ ခွက်ထဲသို့ ထည့်သည်။ ဤမှိုများမှ ထုတ်လုပ်သော မျိုးစေ့များသည် ငယ်ရွယ်သော စပါးပင်များတွင် တစ်ပတ်အတွင်း ရောဂါပိုးကူးစက်စေခဲ့သည်။
မျိုးစေ့ပြင်ဆင်ခြင်း
လယ်ကွင်းတွင် မစိုက်ပျိုးမီ စပါးမျိုးစေ့ကို မှိုသတ်ဆေး၊ ပိုးသတ်ဆေးနှင့် Spirato 480 FS မှိုသတ်ဆေး ၁% ခန့်၊ Sebring 480 FS မှိုသတ်ဆေး ၄%၊ Sorpro 940 ES မျိုးစေ့မှိုသတ်ဆေး ၃% ပါဝင်သော safener အရောအနှောဖြင့် ကုသခဲ့သည်။ ထို့နောက် မျိုးစေ့များကို ၃ ရက်ကြာ လေမှုတ်အခြောက်ခံခဲ့ပြီး မျိုးစေ့များပတ်လည်တွင် ဤအရောအနှောကို ပါးလွှာစွာ ဖုံးအုပ်ပေးခဲ့သည်။ safener ကြောင့် Dual Magnum ကို အပင်မပေါက်မီ ကုသမှုအဖြစ် ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ် အသုံးပြုနိုင်ခဲ့သည်။
ပစ်မှတ်အရွက်အစက်အပြောက်ခံနိုင်ရည်ရှိမှုအကဲဖြတ်ခြင်း
SCP ကို ၂၀၁၇ ခုနှစ် ဇွန်လ ၁၄-၁၅ ရက်နှင့် ၂၀၁၈ ခုနှစ် ဇွန်လ ၂၀ ရက်တို့တွင် NC၊ Clayton ရှိ Central Crops Research Station တွင် randomized complete block design ဖြင့် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ စမ်းသပ်မှုများကို မြေကွက်တစ်ခုလျှင် မျိုးစေ့ ၁၀ စေ့ကို အသုံးပြု၍ အတန်းအကျယ် ၀.၉ မီတာရှိသော ၁.၈ မီတာရှိသော တစ်တန်းစီတွင် စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ အစွန်းအကျိုးသက်ရောက်မှုများကို ကာကွယ်ရန်အတွက် စမ်းသပ်မှုတစ်ခုစီ၏ အပြင်ဘက်တွင် နယ်နိမိတ်တန်းနှစ်တန်းကို စိုက်ပျိုးခဲ့သည်။ စမ်းသပ်မှုများကို ၂၀၁၇ ခုနှစ် ဇူလိုင်လ ၂၀ ရက်နှင့် ၂၀၁၈ ခုနှစ် ဇူလိုင်လ ၂၀ ရက်တွင် sorghum အပင်များသည် ကြီးထွားမှုအဆင့် ၃ တွင် ရှိနေခဲ့သည်။ အဆင့်သတ်မှတ်ချက်များကို တစ်မှ ကိုးအထိ စကေးဖြင့် ကောက်ယူခဲ့ပြီး ရောဂါလက္ခဏာမပြသော အပင်များကို ကိုးအဖြစ် အမှတ်ပေးခဲ့ပြီး လုံးဝသေနေသော အပင်များကို တစ်အဖြစ် အမှတ်ပေးခဲ့သည်။ ၂၀၁၇ ခုနှစ်တွင် အဆင့်သတ်မှတ်ချက်နှစ်ခုနှင့် ၂၀၁၈ ခုနှစ်တွင် နှစ်စဉ် ကူးစက်ခံရပြီး နှစ်ပတ်အကြာတွင် စတင်၍ ဖတ်ရှုမှုလေးခု ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ sAUDPC (ရောဂါတိုးတက်မှုမျဉ်းကွေးအောက်ရှိ စံသတ်မှတ်ထားသောဧရိယာ) ကို ယခင်ကဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း တွက်ချက်ခဲ့သည်။
ပို့စ်တင်ချိန်: ၂၀၂၁ ခုနှစ်၊ ဧပြီလ ၁ ရက်