Nature.com ကိုလာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းတွင် CSS ပံ့ပိုးမှုအကန့်အသတ်ရှိသည်။အကောင်းဆုံးရလဒ်များအတွက်၊ သင့်ဘရောက်ဆာ၏ ဗားရှင်းအသစ်ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုလိုပါသည် (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီမှုမုဒ်ကို ပိတ်ပါ)။ဤအတောအတွင်း၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးကူညီမှုသေချာစေရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် စတိုင်ပုံစံ သို့မဟုတ် JavaScript မပါဘဲ ဆိုက်ကို ပြသနေပါသည်။
သဘာဝ ထုတ်ကုန်များကို ရှာဖွေတွေ့ရှိပြီး အကျိုးရှိစွာ အသုံးပြုခြင်းသည် လူ့ဘ၀ကို တိုးတက်စေနိုင်သည်။အပင်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားသော ဓာတုပစ္စည်းများကို ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် အသုံးပြုကြသည်။ပေါင်းသတ်ဆေး အမျိုးအစားအမျိုးမျိုးကို အသုံးပြုရန် လိုအပ်သောကြောင့် ဒြပ်ပေါင်းများကို လုပ်ဆောင်ချက် ယန္တရားအသစ်များဖြင့် ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ဤလေ့လာမှုတွင် Streptomyces werraensis MK493-CF1 မှ N -alkoxypyrrole ဒြပ်ပေါင်း၊ coumamonamide ကိုတွေ့ရှိခဲ့ပြီး ပြီးပြည့်စုံသောပေါင်းစပ်မှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို တည်ထောင်ခဲ့ပါသည်။ဇီဝဗေဒလုပ်ဆောင်မှု ဆန်းစစ်ချက်များမှတစ်ဆင့်၊ urs-monoamic acid သည် urs-monoamide ၏ ပေါင်းစပ်အလယ်အလတ်ဖြစ်ပြီး အလားအလာတစ်ခုဖြစ်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့တွေ့ရှိခဲ့သည်။အပင်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားပေးသည်။.ထို့အပြင်၊ HeLa ဆဲလ်များ၏ကြီးထွားမှုကိုအပျက်သဘောဆောင်သောမထိခိုက်စေဘဲမြင့်မားသောပေါင်းသတ်ဆေးများပါ ၀ င်သော urbenyloxy derivative (UDA) အပါအဝင် urbenonic acid ဆင်းသက်လာမှုအမျိုးမျိုးကို တီထွင်ထုတ်လုပ်ထားပါသည်။urmotonic acid ၏ ဆင်းသက်လာမှုသည် အပင် microtubules များကို နှောက်ယှက်ခြင်း ဖြစ်သည် ။ထို့အပြင် KAND သည် actin အမျှင်များကို ထိခိုက်စေပြီး ဆဲလ်သေများကို ဖြစ်စေသည်။ဤဘက်စုံသုံးသက်ရောက်မှုများသည် လူသိများသော microtubule inhibitors များနှင့် ကွဲပြားပြီး ပေါင်းသတ်ဆေးအသစ်များ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အရေးကြီးသော အားသာချက်ကို ကိုယ်စားပြုသည့် ursonic acid အတွက် လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားအသစ်ကို အကြံပြုပါသည်။
အကျိုးပြု သဘာဝထုတ်ကုန်များနှင့် ၎င်းတို့၏ ဆင်းသက်လာမှုများကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်းနှင့် လက်တွေ့အသုံးချခြင်းသည် လူ့ဘဝအရည်အသွေးကို မြှင့်တင်ပေးသည့် နည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။အဏုဇီဝသက်ရှိများ၊ အပင်များနှင့် အင်းဆက်ပိုးမွှားများမှ ထုတ်လုပ်သော ဒုတိယ ဇီဝဖြစ်စဉ်များသည် ဆေးနှင့် စိုက်ပျိုးရေးတွင် ကြီးမားသော တိုးတက်မှုကို ဖြစ်စေသည်။ပဋိဇီဝဆေးများနှင့် သွေးကင်ဆာ ဆန့်ကျင်ဆေး အများအပြားကို သဘာဝ ထုတ်ကုန်များမှ ထုတ်လုပ်ထားသည်။ထို့အပြင် အမျိုးအစား အမျိုးမျိုးရှိသည်။ပိုးသတ်ဆေးမှိုသတ်ဆေးနှင့် ပေါင်းသတ်ဆေးများကို စိုက်ပျိုးရေးတွင် အသုံးပြုရန်အတွက် ဤသဘာဝထွက်ကုန်များမှ ထုတ်ယူပါသည်။အထူးသဖြင့် ပေါင်းသတ်ဆေး ပေါင်းသတ်ဆေးများသည် ခေတ်မီစိုက်ပျိုးရေးတွင် သီးနှံအထွက်နှုန်းတိုးစေရေးအတွက် အရေးကြီးသောကိရိယာများဖြစ်ပြီး ဒြပ်ပေါင်းအမျိုးအစား အမျိုးမျိုးကို စီးပွားဖြစ်အသုံးပြုနေပြီဖြစ်သည်။အပင်များရှိ ဆဲလ်လူလာ လုပ်ငန်းစဉ် အများအပြားဖြစ်သည့် ဓါတ်ပြုခြင်း ၊ အမိုင်နိုအက်ဆစ် ဇီဝြဖစ်ပျက် ၊ ဆဲလ်နံရံ ပေါင်းစပ်မှု ၊ mitosis ၏ ထိန်းညှိမှု ၊ phytohormone အချက်ပြခြင်း သို့မဟုတ် ပရိုတင်း ပေါင်းစပ်ခြင်းကို ပေါင်းသတ်ဆေး များ၏ ပုံမှန် ပစ်မှတ် အဖြစ် သတ်မှတ် သည် ။microtubule လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားသော ဒြပ်ပေါင်းများသည် mitotic စည်းမျဉ်းကို ထိခိုက်စေသောကြောင့် အပင်ကြီးထွားမှုကို ထိခိုက်စေသော ပေါင်းသတ်ဆေးများဖြစ်သည်။
Microtubules များသည် cytoskeleton ၏ အစိတ်အပိုင်းများဖြစ်ပြီး eukaryotic ဆဲလ်များတွင် ကျယ်ပြန့်စွာ ထိန်းသိမ်းထားသည်။tubulin heterodimer တွင် α-tubulin နှင့် β-tubulin တို့သည် linear microtubule protofilaments များဖွဲ့စည်းထားကာ ဆလင်ဒါပုံသဏ္ဍာန်ဖွဲ့စည်းပုံတွင် 13 protofilament များပါဝင်ပါသည်။Microtubules များသည် ဆဲလ်ပုံသဏ္ဍာန်ကို အဆုံးအဖြတ်ပေးခြင်း၊ ဆဲလ်ပိုင်းခြားခြင်းနှင့် အတွင်းဆဲလ်များ သယ်ယူပို့ဆောင်ခြင်း3,4 တို့အပါအဝင် အပင်ဆဲလ်များတွင် အခန်းကဏ္ဍများစွာပါဝင်ပါသည်။အပင်ဆဲလ်များတွင် interphase ပလာစမာအမြှေးပါးအောက်ရှိ microtubules များပါ၀င်ပြီး အဆိုပါ cortical microtubules များသည် cellulose synthase complexes 4,5 ၏စည်းမျဉ်းအားဖြင့် cellulose microfibrils ၏ဖွဲ့စည်းမှုကိုထိန်းချုပ်ရန်ယူဆကြသည်။အမြစ်ထိပ်ဖျား၏ လျင်မြန်စွာ ရှည်လျားသော ဇုန်တွင်ရှိသော အမြစ် epidermal ဆဲလ်များ၏ Cortical microtubules များသည် ဘေးတွင်တည်ရှိပြီး cellulose microfiber များသည် အဆိုပါ microtubules များကို လိုက်နာကာ ဆဲလ်ချဲ့ခြင်း၏ ဦးတည်ရာကို ကန့်သတ်ထားသောကြောင့် anisotropic cell elongation ကို မြှင့်တင်ပေးပါသည်။ထို့ကြောင့်၊ microtubule လုပ်ဆောင်ချက်သည် အပင်ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် နီးကပ်စွာ ဆက်စပ်နေသည်။tubulin ကို ကုဒ်သွင်းသည့် ဗီဇတွင် အမိုင်နိုအက်ဆစ် အစားထိုးခြင်းသည် ကော်တီတစ်မိုက်ခရိုတီဘီ အခင်းအကျင်းများနှင့် Arabidopsis 6,7 တွင် ဘယ်ဘက် သို့မဟုတ် ညာဘက်အခြမ်း ကြီးထွားမှုကို ဖြစ်စေသည်။အလားတူ၊ microtubule ဒိုင်းနမစ်များကို ထိန်းညှိပေးသော microtubule-ဆက်စပ်ပရိုတင်းများတွင် ဗီဇပြောင်းလဲမှုများသည် အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ပုံပျက်သွားစေသည် 8,9,10,11,12,13 သို့လည်း ဦးတည်သွားနိုင်သည်။ထို့အပြင်၊ pretilachlor ဟုလည်းလူသိများသော disopyramide ကဲ့သို့သော microtubule-နှောင့်ယှက်သောပေါင်းသတ်ဆေးများနှင့်ကုသမှုသည်ဘယ်ဘက်ခြမ်း oblique အမြစ်ကြီးထွားမှုကိုလည်းဖြစ်ပေါ်စေသည်။ဤအချက်အလက်များသည် အပင်ကြီးထွားမှုလမ်းကြောင်းကို ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက် တိကျသော microtubule လုပ်ဆောင်မှု၏ စည်းမျဉ်းစည်းကမ်းသည် အရေးကြီးကြောင်း ဖော်ပြသည်။
microtubule inhibitors အမျိုးအစားအမျိုးမျိုးကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့ပြီး အဆိုပါဆေးများသည် cytoskeletal သုတေသနအပြင် စိုက်ပျိုးရေးနှင့် ဆေးပညာအတွက် သိသာထင်ရှားသော ပံ့ပိုးကူညီမှုများ ပြုလုပ်ပေးခဲ့သည်။အထူးသဖြင့်၊ oryzalin၊ dinitroaniline ဒြပ်ပေါင်းများ၊ disopyramide၊ benzamide ဆိုင်ရာဒြပ်ပေါင်းများနှင့် ၎င်းတို့၏ analog များသည် microtubule လုပ်ဆောင်မှုကို ဟန့်တားနိုင်ပြီး အပင်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားနိုင်သည်။ထို့ကြောင့် ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ် တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုကြသည်။သို့ရာတွင်၊ microtubules များသည် အပင်နှင့်တိရစ္ဆာန်ဆဲလ်များ၏ အရေးကြီးသော အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်သောကြောင့် microtubule inhibitors အများစုသည် ဆဲလ်အမျိုးအစားနှစ်မျိုးစလုံးအတွက် cytotoxic ဖြစ်ကြပါသည်။ထို့ကြောင့် ၎င်းတို့၏ အသုံးဝင်မှုကို ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ် အသိအမှတ်ပြုထားသော်လည်း၊ အကန့်အသတ်ရှိသော ပိုးသတ်ဆေးများကို လက်တွေ့ရည်ရွယ်ချက်များအတွက် အသုံးပြုပါသည်။
Streptomyces သည် aerobic၊ gram-positive၊ filamentous ဘက်တီးရီးယားများပါ ၀ င်သောမိသားစု Streptomyces ၏မျိုးစိတ်တစ်ခုဖြစ်ပြီး၎င်း၏ဒုတိယဇီဝြဖစ်စဉ်များစွာကိုထုတ်လုပ်နိုင်သောကြောင့်ကျယ်ပြန့်စွာလူသိများသည်။ထို့ကြောင့်၊ ၎င်းကို ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ တက်ကြွသော သဘာဝထုတ်ကုန်အသစ်များ၏ အရေးအပါဆုံးရင်းမြစ်များထဲမှ တစ်ခုဟု ယူဆပါသည်။လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ Streptomyces werraensis MK493-CF1 နှင့် S. werraensis ISP 5486 တို့မှ သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော coumamonamide ဟုခေါ်သော ဒြပ်ပေါင်းအသစ်တစ်ခုကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ရောင်စဉ်တန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုနှင့် ရောင်စဉ်တန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို အသုံးပြု၍ coumamonamide ၏ဖွဲ့စည်းပုံမှာ ထူးခြားပြီး ၎င်း၏ထူးခြားသော N-alkoxypyrrole အရိုးစုဖြစ်သည်။ ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။ပေါင်းစပ်မှု။Ursmonic acid သည် ursmonoamide နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာမှုတို့၏ ပေါင်းစပ်အလယ်အလတ်ဖြစ်သော Ursmonic acid သည် နာမည်ကျော် Arabidopsis thaliana အပင်၏ ကြီးထွားမှုနှင့် ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားရန် တွေ့ရှိခဲ့သည်။ဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံ-လှုပ်ရှားမှုဆိုင်ရာ လေ့လာမှုတစ်ခုတွင်၊ C9 ပါသော ursonic acid တွင် ပြုပြင်ထားသော ဒြပ်ပေါင်းသည် ursonic acid (KAND) ၏ nonyloxy ဆင်းသက်လာမှုဟုခေါ်သော ကြီးထွားမှုနှင့် ကြီးထွားမှုအပေါ် ဟန့်တားသည့်အကျိုးသက်ရောက်မှုကို သိသိသာသာတိုးမြင့်စေကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ထင်ရှားသည်မှာ အသစ်တွေ့ရှိထားသော အပင်ကြီးထွားမှုကို တားဆီးပေးသည့်ဆေးသည် ဆေးရွက်ကြီးနှင့် အသည်းwort များ၏ ကြီးထွားမှုကို ထိခိုက်စေပြီး ဘက်တီးရီးယား သို့မဟုတ် HeLa ဆဲလ်များကို cytotoxic မဖြစ်စေပါ။ထို့အပြင်၊ အချို့သော urmotonic acid ဆင်းသက်လာမှုသည် ပုံပျက်နေသော အမြစ် phenotype ကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး အဆိုပါ ဆင်းသက်လာမှုသည် microtubules များကို တိုက်ရိုက် သို့မဟုတ် သွယ်ဝိုက်၍ဖြစ်စေ သက်ရောက်သည်ဟု ဆိုလိုသည်။ဤအယူအဆနှင့်အညီ၊ immunohistochemical သို့မဟုတ် fluorescent ပရိုတင်းများဖြင့် တံဆိပ်တပ်ထားသော microtubules များ၏ လေ့လာတွေ့ရှိချက်များအရ KAND ကုသမှုသည် microtubules ကို depolymerizes ကြောင်း ဖော်ပြသည်။ထို့အပြင်၊ kumamotonic acid အနကျအဓိပ်ပါယ်များဖြင့် ကုသခြင်းသည် actin microfilaments ကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေသည်။ထို့ကြောင့်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် cytoskeleton ကို ဖျက်ဆီးခြင်း ပါ၀င်သော ထူးခြားသော လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားဖြစ်သည့် အပင်ကြီးထွားမှု တားဆီးပေးသည့် အသစ်ကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။
Strain MK493-CF1 ကို တိုကျို၊ Shinagawa-ku ရှိ မြေဆီလွှာမှ သီးခြားခွဲထုတ်ခဲ့သည်။Strain MK493-CF1 သည် ကောင်းမွန်သော အကိုင်းအခက် stromal mycelium ကို ဖွဲ့စည်းခဲ့သည်။16S ribosomal RNA ဗီဇ (1422 bp) ၏ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း အစီအစဥ်ကို ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။ဤမျိုးကွဲသည် S. werraensis (NBRC 13404T = ISP 5486၊ 1421/1422 bp၊ T- ပုံမှန်မျိုးကွဲ၊ 99.93%) နှင့် အလွန်ဆင်တူသည်။ဤရလဒ်အပေါ်အခြေခံ၍ ဤမျိုးကွဲသည် S. werraensis အမျိုးအစားနှင့် နီးကပ်စွာဆက်စပ်နေသည်ဟု ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။ထို့ကြောင့်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ဤမျိုးကွဲကို S. werraensis MK493-CF1 ဟု ယာယီအမည်ပေးခဲ့သည်။S. werraensis ISP 5486T သည် အလားတူ ဇီဝဗေဒဒြပ်ပေါင်းများကို ထုတ်လုပ်သည်။ဤသေးငယ်သောဇီဝသက်ရှိများထံမှ သဘာဝထုတ်ကုန်များရရှိရန် အစောပိုင်းသုတေသနပြုမှုအနည်းငယ်သာရှိသောကြောင့် နောက်ထပ်ဓာတုသုတေသနကို ပြုလုပ်ခဲ့ပါသည်။S. werraensis MK493-CF1 ကို မုယောစပါးအလတ်စားတွင် 30°C တွင် ၁၄ ရက်ကြာ အချဉ်ဖောက်ခြင်းဖြင့် စပါးအလတ်ကို 50% EtOH ဖြင့် ထုတ်ယူခဲ့သည်။အကြမ်းဖျင်းထုတ်ယူမှု 59.5 mg ရရှိရန် နမူနာ 60 ml ကို အခြောက်လှန်းခဲ့သည်။အကြမ်းဖျင်းထုတ်ယူမှုကို N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, coumamonamide, 36.0 mg) ပေးရန်အတွက် ပြောင်းပြန်အဆင့် HPLC တွင် ထားရှိခဲ့သည်။စုစုပေါင်း 1 ပမာဏသည် အကြမ်းထုတ်ယူမှု၏ 60% ခန့်ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့် kumamotoamide 1 ၏ ဂုဏ်သတ္တိများကို အသေးစိတ်လေ့လာရန် ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။
Coumamonamide 1 သည် အဖြူရောင် amorphous အမှုန့်ဖြစ်ပြီး မြင့်မားသော ရုပ်ထွက်အစုလိုက် အပြုံလိုက် spectrometry (HRESIMS) သည် C6H8N2O2 (ပုံ 1) ကို အတည်ပြုသည်။ဤဒြပ်ပေါင်း၏ C2-အစားထိုး pyrrole အပိုင်းသည် δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH, 1H NMR spectrum: 4.5 Hz , H-5) နှင့် δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), နှင့် 13C NMR ရောင်စဉ် sp2 ကာဗွန်အက်တမ်လေးခု၏ရှေ့မှောက်တွင်ပြသသည်။C2 အနေအထားတွင် amide အုပ်စုတစ်ခုရှိနေခြင်းကို δC 161.1 တွင် δC 161.1 တွင် HMBC ပရိုတွန်မှ အမိုင်ဒီကာဗွန်နဲလ်ကာဗွန်နှင့် HMBC ဆက်စပ်မှုကို အကဲဖြတ်သည်။ထို့အပြင် δH 4.10 (3H, S) နှင့် δC 68.3 တွင် 1 H နှင့် 13 C NMR သည် မော်လီကျူးအတွင်း N-methoxy အုပ်စုများ ရှိနေခြင်းကို ညွှန်ပြသည်။ပိုမိုကောင်းမွန်သောခြားနားချက် spectroscopy နှင့် nuclear Overhauser အတိုကောက် (NOEDF) ကဲ့သို့သော spectroscopic ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို အသုံးပြု၍ မှန်ကန်သောအနေအထားကို မဆုံးဖြတ်ရသေးသော်လည်း၊ N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide သည် ပထမဆုံးပါဝင်သည့်ဒြပ်ပေါင်းဖြစ်လာခဲ့သည်။
1 ၏ မှန်ကန်သော ဖွဲ့စည်းပုံကို ဆုံးဖြတ်ရန် စုစုပေါင်း ပေါင်းစပ်မှုကို လုပ်ဆောင်ခဲ့သည် (ပုံ။ 2a)။m-CPBA ဖြင့် စီးပွားဖြစ်ရနိုင်သော 2-aminopyridine 2 ကို ကုသခြင်းဖြင့် သက်ဆိုင်ရာ N-oxide 3 ကို အရေအတွက်အထွက်နှုန်းကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။2-aminoazidation ပြီးနောက်၊ Abramovich မှဖော်ပြသော cyclocondensation တုံ့ပြန်မှုကို လိုချင်သော 1-hydroxy-1H-pyrrole-2-carbonitrile 5 in ဂရမ်ကိုရရှိရန် benzene 90°C တွင် benzene ဖြင့်လုပ်ဆောင်သည်။အရှိန် 60% (အဆင့်နှစ်ဆင့်)။၁၅၊၁၆။ထို့နောက် 4 ၏ မက်သွိုင်းရှင်းနှင့် ဟိုက်ဒရောလစ်စီ 1-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxylic acid (“cumotonic acid”၊ 6) ကို ကောင်းမွန်သောအထွက်နှုန်း (70% အဆင့်နှစ်ဆင့်) ပေးသည်။နောက်ဆုံးတွင်၊ aqueous ammonia ကို အသုံးပြု၍ အက်ဆစ်ကလိုရိုက် အလယ်အလတ် 6 မှတစ်ဆင့် စွန့်ထုတ်ခြင်းသည် Kumamoto amide 1 တွင် 98% အထွက်နှုန်းကို ပေးသည်။ပေါင်းစပ်ထားသော 1 ၏ ရောင်စဉ်တန်းဒေတာအားလုံးသည် သီးခြား 1 နှင့် ဆင်တူသောကြောင့် 1 ၏ ဖွဲ့စည်းပုံကို ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည်။
urbenamide နှင့် urbenic acid တို့၏ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်များကို အထွေထွေ ပေါင်းစပ်ခြင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။(က) Kumamoto amide ၏ စုစုပေါင်းပေါင်းစပ်မှု။(ခ) ခုနစ်ရက်သားအရွယ် အရိုင်းမျိုးစိတ် Arabidopsis Columbia (Col) ပျိုးပင်များကို coumamonamide 6 သို့မဟုတ် coumamonamide 1 ပါဝင်သော Murashige နှင့် Skoog (MS) ပန်းကန်ပြားများတွင် စိုက်ပျိုးခဲ့ပါသည်။စကေးဘား = 1 စင်တီမီတာ။
ပထမဦးစွာ၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် အပင်ကြီးထွားမှုကို ထိန်းညှိပေးနိုင်စွမ်းအတွက် urbenamide နှင့် ၎င်း၏ကြားခံပစ္စည်းများ၏ ဇီဝဆိုင်ရာလုပ်ဆောင်ချက်များကို အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။ကျွန်ုပ်တို့သည် ursmonamide 1 သို့မဟုတ် ursmonic acid 6 ၏ ပြင်းအားအမျိုးမျိုးကို MS agar ကြားခံနှင့် ပျိုးထောင်ထားသော Arabidopsis thaliana ပျိုးပင်များသို့ ဤအလတ်စားတွင် ထည့်ထားသည်။ဤစစ်ဆေးမှုများသည် 6 အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားထားသော ပြင်းအား (500 μM) ရှိကြောင်းပြသခဲ့သည် (ပုံ။ 2b)။ထို့နောက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် 6 ၏ N1 အနေအထားကို အစားထိုးပြီး ၎င်းတို့တွင် ဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံ-လှုပ်ရှားမှုဆိုင်ရာ ဆက်ဆံရေးလေ့လာမှုများပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် အမျိုးမျိုးသော ဆင်းသက်လာများကို ထုတ်ပေးခဲ့သည် (၎င်းတို့ကို ပံ့ပိုးပေးသည့် အချက်အလက် (SI) တွင် ဖော်ပြထားသည့် analogue ပေါင်းစပ်မှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို ဖော်ပြသည်)။Arabidopsis ပျိုးပင်များကို 50 μM ursonic acid ဆင်းသက်လာသော အလယ်အလတ်တွင် စိုက်ပျိုးခဲ့ပြီး အမြစ်အရှည်ကို တိုင်းတာခဲ့သည်။ပုံတွင်ပြထားသည့်အတိုင်း။ပုံ 3a၊ b နှင့် S1 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ coumamo acids များသည် linear alkoxy chains (9၊ 10၊ 11၊ 12၊ နှင့် 13) သို့မဟုတ် ကြီးမားသော alkoxy ကြိုးများ (15၊ 16၊ နှင့် 17) ၏ N1 အနေအထားတွင်ရှိသည်။ဆင်းသက်လာမှုများသည် အမြစ်ကြီးထွားမှုကို သိသိသာသာ ဟန့်တားကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ထို့အပြင်၊ 200 μM 10၊ 11၊ သို့မဟုတ် 17 အပင်ပေါက်ခြင်းကို ဟန့်တားသော အသုံးချမှု (ပုံ။ 3c နှင့် S2) တို့ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။
Kumamoto amide နှင့်ဆက်စပ်ဒြပ်ပေါင်းများ၏ဖွဲ့စည်းပုံ-လှုပ်ရှားမှုဆက်နွယ်မှုကိုလေ့လာမှု။(က) analogues များ၏ဖွဲ့စည်းပုံနှင့်ပေါင်းစပ်မှုအစီအစဉ်။(ခ) 50 μM coumamonamide ဆင်းသက်လာမှုနှင့်အတူ MS အလယ်အလတ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသော 7 ရက်သားအရွယ်ပျိုးပင်များ၏ အမြစ်အရှည် ပမာဏကို တိုင်းတာခြင်း။ကြယ်ပွင့်များသည် အတုအယောင်ကုသမှုနှင့် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ညွှန်ပြသည် (t စမ်းသပ်မှု၊ စ< 0.05)။n>18. ဒေတာကို ဆိုလိုရင်း ± SD အဖြစ် ပြထားသည်။nt ဆိုသည်မှာ မျိုးစေ့များ၏ 50% ကျော်သည် မပေါက်သောကြောင့် “မစမ်းသပ်ရသေး” ဟုဆိုလိုသည်။(ဂ) MS အလတ်စားတွင် 7 ရက်ကြာ ပေါက်ဖွားသော ကုသထားသော အစေ့များ၏ အပေါက်နှုန်း ပမာဏ 200 μM coumamonamide နှင့် ဆက်စပ်ဒြပ်ပေါင်းများ ပါဝင်သည် ။သင်္ကေတများသည် အတုအယောင်ကုသမှု (chi-square စမ်းသပ်မှု) နှင့် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ဖော်ပြသည်။n=96။
စိတ်ဝင်စားစရာမှာ၊ C9 ထက် ပိုရှည်သော alkyl ဘေးထွက်ကြိုးများကို ပေါင်းထည့်ခြင်းသည် တားဆေးလုပ်ဆောင်မှုကို လျော့ကျစေပြီး၊ kumamotoic acid နှင့် ဆက်စပ်သော ဒြပ်ပေါင်းများသည် ၎င်းတို့၏ ဇီဝကမ္မလုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြသရန် အရွယ်အစားရှိ ဘေးထွက်ကြိုးများ လိုအပ်သည်ဟု အကြံပြုထားသည်။
ဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံ-လုပ်ဆောင်ချက်ဆိုင်ရာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရ C9 ကို ursonic acid သို့ ပြုပြင်မွမ်းမံပြီး ursonic acid ၏ nonyloxy ဆင်းသက်လာမှု (ယခုနောက်ပိုင်းတွင် KAND 11 အဖြစ် ရည်ညွှန်းသည်) သည် အထိရောက်ဆုံး အပင်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားပေးသောကြောင့် KAND 11 ၏ အသေးစိတ်လက္ခဏာရပ်ကို ကျွန်ုပ်တို့လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ Arabidopsis ကို ကုသခြင်း 50 μM KAND 11 ဖြင့် အပင်ပေါက်ခြင်းကို လုံးဝနီးပါး တားဆီးထားသော်လည်း KAND 11 ၏ ပြင်းအား (40၊ 30၊ 20၊ သို့မဟုတ် 10 μM) သည် ဆေးပမာဏပေါ်မူတည်၍ အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားထားသည်။KAND 11 သည် အမြစ် meristem ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို သက်ရောက်မှုရှိမရှိ စမ်းသပ်ရန်အတွက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ပရောပဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက် (PI) ဖြင့် စွန်းထင်းနေသော အမြစ် meristem များကို စစ်ဆေးပြီး meristem ဧရိယာအရွယ်အစားကို တိုင်းတာပါသည်။25 μM KAND-11 ပါဝင်သော ကြားခံတွင် စိုက်ပျိုးထားသော ပျိုးပင်များ၏ အရွယ်အစားမှာ 151.1 ± 32.5 μm ဖြစ်ပြီး DMSO ပါဝင်သော ထိန်းချုပ်ခံကြားခံတွင် စိုက်ပျိုးထားသော ပျိုးပင်များ၏ အရွယ်အစားမှာ 264.7 ± 30.8 μm (ပုံ။ 4c၊ d)၊ KAND-11 သည် ဆယ်လူလာလုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြန်လည်လုပ်ဆောင်ကြောင်း ညွှန်ပြသည်။ပျံ့နှံ့ခြင်း။အမြစ် meristem ။၎င်းနှင့်အညီ၊ KAND 11 ကုသမှုသည် အမြစ် meristem ရှိ ဆဲလ်ကွဲပြားမှုအမှတ်အသား CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS အချက်ပြမှုပမာဏကို လျှော့ချပေးသည် (ပုံ။ 4e) 17 .ဤရလဒ်များက KAND 11 သည် ဆဲလ်ပွားခြင်းလုပ်ဆောင်မှုကို လျှော့ချခြင်းဖြင့် အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားကြောင်း ဖော်ပြသည်။
ကြီးထွားမှုအပေါ် ယူရိုဘင်နစ်အက်ဆစ် အနကျအဓိပ်ပါယျများ (urbenyloxy derivatives) ၏ တားဆေးအကျိုးသက်ရောက်မှုကို လေ့လာခြင်း။(က) KAND 11 ၏ ပြင်းအား ညွှန်ပြသော MS ပန်းကန်ပြားများပေါ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသည့် 7 ရက်သား အရွယ် အရိုင်းမျိုးရိုး ပျိုးပင်များ။ စကေးဘား = 1 စင်တီမီတာ။(ခ) အမြစ်အရှည် အရေအတွက်။စာလုံးများသည် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ညွှန်ပြသည် (Tukey HSD စမ်းသပ်မှု၊ စ< 0.05)။n>16. ဒေတာကို ဆိုလိုရင်း ± SD အဖြစ် ပြထားသည်။(ဂ) 25 μM KAND 11 မပါသော MS ပြားများပေါ်တွင် ပေါက်သော ပရောပဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက်-စွန်းထင်းနေသော တောရိုင်းအမျိုးအစား Col အမြစ်များ၏ ဖော်မြူလာစကုပ်များ။စကေးဘား = 100 µm ။(ဃ) အမြစ် meristem အရွယ်အစား ပမာဏ (n = 10 မှ 11)။t-test ကို အသုံးပြု၍ ကိန်းဂဏန်းကွဲပြားမှုများကို ဆုံးဖြတ်ခဲ့သည် (စ< 0.05)။ဘားများသည် ပျမ်းမျှ meristem အရွယ်အစားကို ကိုယ်စားပြုသည်။(င) CDKB2 တည်ဆောက်မှုပါရှိသော အမြစ် meristem ၏ Differential interference contrast (DIC) microscopy၊1pro: CDKB2;1-GUS သည် 25 µM KAND စစ်ဆေးမှုဖြင့် သို့မဟုတ် မပါသော MS ပန်းကန်ပြားများပေါ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသော 5 ရက်သားအရွယ်ပျိုးပင်များကို စွန်းထင်းစေပါသည်။
KAND 11 ၏ phytotoxicity သည် အခြားသော အမြှေးပါးအပင်၊ ဆေးရွက်ကြီး (Nicotiana tabacum) နှင့် အဓိက မြေပြင်အပင် စံပြသက်ရှိ ဖြစ်သည့် liverwort (Marchantia polymorpha) ကို အသုံးပြု၍ ထပ်မံ စမ်းသပ်ခဲ့ပါသည်။Arabidopsis တွင်ကဲ့သို့ပင် 25 μM KAND 11 ပါဝင်သော အလယ်အလတ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသော ဆေးရွက်ကြီး SR-1 ပျိုးပင်များသည် ပိုတိုသော အမြစ်များ (ပုံ 5a) ကို ထုတ်ပေးပါသည်။ထို့အပြင်၊ 200 μM KAND 11 ပါ၀င်သော ပန်းကန်ပြားပေါ်တွင် မျိုးစေ့ ၄၈ စေ့မှ ၄၀ စေ့ခန့် ပေါက်ခဲ့သော်လည်း အစေ့ ၄၈ စေ့စလုံးသည် လှောင်ပြောင်ကုသထားသော မီဒီယာတွင် ပေါက်နေသဖြင့် KAND ၏ ပြင်းအား ပိုများကြောင်း ညွှန်ပြနေသည် (p< 0.05;chi test -square) သည် ဆေးရွက်ကြီးပေါက်ခြင်းကို ဟန့်တားသည်။(ပုံ။ 5b)။ထို့အပြင်၊ liverwort တွင်ဘက်တီးရီးယားကြီးထွားမှုကိုဟန့်တားသော KAND 11 ၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည် Arabidopsis တွင်ထိရောက်သောအာရုံစူးစိုက်မှု (ပုံ။ 5c) နှင့်ဆင်တူသည်။ဤရလဒ်များက KAND 11 သည် အပင်အမျိုးမျိုး၏ ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားနိုင်ကြောင်း ဖော်ပြသည်။ထို့နောက် မြင့်မားသောတိရစ္ဆာန်နှင့် ဘက်တီးရီးယားဆဲလ်များ၏ ကိုယ်စားလှယ်များအဖြစ် လူသား HeLa ဆဲလ်များနှင့် Escherichia coli strain DH5α ဟုခေါ်သော အခြားသက်ရှိများတွင် ဝက်ဝံ monoamide ဆက်စပ်ဒြပ်ပေါင်းများ၏ ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော cytotoxicity ကို စုံစမ်းစစ်ဆေးခဲ့ပါသည်။ဆဲလ်ပြန့်ပွားမှု စစ်ဆေးမှု ဆက်တိုက်တွင်၊ coumamonamide 1၊ coumamonamidic acid 6 နှင့် KAND 11 သည် ပြင်းအား 100 μM (ပုံ 5d၊ e) တွင် HeLa သို့မဟုတ် E. coli ဆဲလ်များ ကြီးထွားမှုကို မထိခိုက်စေကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ တွေ့ရှိခဲ့သည်။
Arabidopsis မဟုတ်သောသက်ရှိများတွင် KAND 11 ၏ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားခြင်း။(က) 25 μM KAND 11 ပါဝင်သော ဒေါင်လိုက်အနေအထားဖြင့် MS ပန်းကန်ပြားများပေါ်တွင် သီတင်းနှစ်ပတ်သား အရွယ်ရှိ တောရိုင်းအမျိုးအစား SR-1 ဆေးရွက်ကြီးပျိုးပင်များကို အလျားလိုက်အနေအထားဖြင့် စိုက်ပျိုးခဲ့ပါသည်။ 200 μM KAND 11 ပါ၀င်သော MS ပန်းကန်ပြားများ။ (ဂ) KAND 11 ၏ ပြင်းအား ညွှန်ပြသော Gamborg B5 ပြားများပေါ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသော နှစ်ပတ်သား သက်တမ်းရှိသော တောရိုင်း အမျိုးအစား Tak-1 ဘူးသီးများ။ ကာလ။(ဃ) HeLa ဆဲလ်များ၏ ဆဲလ်များပေါက်ပွားမှုကို ဆန်းစစ်ခြင်း။ဆဲလ်ရေတွက်ခြင်းကိရိယာ 8 (Dojindo) ကို အသုံးပြု၍ ပုံသေအချိန်ကြားကာလများတွင် ရှင်သန်နိုင်သောဆဲလ်အရေအတွက်ကို တိုင်းတာခဲ့သည်။ထိန်းချုပ်မှုတစ်ခုအနေဖြင့်၊ HeLa ဆဲလ်များကို 5 μg/ml actinomycin D (Act D) ဖြင့် ကုသပြီး RNA polymerase မှတ်တမ်းကို ဟန့်တားကာ ဆဲလ်သေဖြစ်စေသည်။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို triplicate ဖြင့်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။(င) E. coli ဆဲလ်များ ပြန့်ပွားမှု ဆန်းစစ်ချက်။OD600 ကို တိုင်းတာခြင်းဖြင့် E. coli ကြီးထွားမှုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ထိန်းချုပ်မှုတစ်ခုအနေဖြင့် ဆဲလ်များကို ဘက်တီးရီးယားဆဲလ်နံရံများပေါင်းစပ်မှုကို ဟန့်တားသည့် 50 μg/ml ampicillin (Amp) ဖြင့် ကုသခဲ့သည်။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို triplicate ဖြင့်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
Uramide နှင့် ဆက်နွှယ်သော ဒြပ်ပေါင်းများ ကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော cytotoxicity ၏ လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားကို ပုံဖော်ရန်အတွက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် urbenic acid ဆင်းသက်လာမှုကို အလယ်အလတ် တားစီးနိုင်သော အာနိသင်များဖြင့် ပြန်လည် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့ပါသည်။ပုံတွင်ပြထားသည့်အတိုင်း။ပုံ 2b၊ 6a တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ urmotonic acid 6 ၏မြင့်မားသောပြင်းအား (200 μM) ပါရှိသော ကျောက်ကပ်ပြားပေါ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသော ပျိုးပင်များသည် တိုတောင်းပြီး ဘယ်ဘက်ကွေးအမြစ်များ (θ = – 23.7 ± 6.1) ကို ထုတ်ပေးသည့် ပျိုးပင်များဖြစ်ပြီး၊ ပျိုးပင်များသည် ဖြောင့်တန်းသောအမြစ်များ (θ = – 3.8 ± 7.1) ကို ထုတ်ပေးသည်။cortical microtubules 14,18 ၏ ကမောက်ကမဖြစ်မှုကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသည့် ဤလက္ခဏာရပ်မှာ ကြီးထွားလာခြင်းဖြစ်သည်။ဤတွေ့ရှိချက်နှင့်အညီ၊ microtubule-မတည်မငြိမ်ဖြစ်စေသော disopyramide နှင့် oryzalin တို့သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ကြီးထွားမှုအခြေအနေများအောက်တွင် အလားတူအမြစ်တိမ်းစောင်းခြင်းကိုဖြစ်စေသည် (ပုံ။ 2b၊ 6a)။တစ်ချိန်တည်းမှာပင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် urmotonic acid ဆင်းသက်လာမှုကို စမ်းသပ်ပြီး အချို့သော ပြင်းအားများဖြင့် အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ဖြစ်စေသော ၎င်းတို့ထဲမှ အများအပြားကို ရွေးချယ်ခဲ့သည်။ဒြပ်ပေါင်းများ 8၊ 9 နှင့် 15 တို့သည် 75 μM၊ 50 μM နှင့် 40 μM အသီးသီးရှိ အမြစ်ကြီးထွားမှု ဦးတည်ချက်သို့ ပြောင်းလဲသွားသည်၊ ဤဒြပ်ပေါင်းများသည် microtubules များကို ထိထိရောက်ရောက် မတည်မငြိမ်ဖြစ်စေနိုင်သည်ကို ညွှန်ပြသည် (ပုံ။ 2b၊ 6a)။အစွမ်းထက်ဆုံး ursolic acid ဆင်းသက်လာသော KAND 11 ကိုလည်း အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းပါးသော (15 µM) တွင် စမ်းသပ်ခဲ့ပြီး KAND 11 သည် အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားကာ အမြစ်ကြီးထွားမှု၏ ဦးတည်ရာသည် မညီမညာဖြစ်နေကြောင်း၊ ပုံ C3)။.microtubule-မတည်မငြိမ်ဖြစ်စေသောဆေးဝါးများ၏ပိုမိုပြင်းအားသည် တစ်ခါတစ်ရံတွင် အမြစ်တိမ်းစောင်းခြင်းကိုဖြစ်စေမည့်အစား အပင်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားသောကြောင့်၊ KAND 11 သည် အမြစ် epidermal ဆဲလ်များရှိ cortical microtubules များကိုကြည့်ရှုခြင်းဖြင့် microtubules များအပေါ်သက်ရောက်နိုင်ခြေကို အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။25 μM KAND 11 ဖြင့် ကုသထားသော ပျိုးပင်အမြစ်များ၏ အရေပြားဆဲလ်များရှိ anti-β-tubulin ပဋိပစ္စည်းများကို အသုံးပြု၍ Immunohistochemistry သည် ရှည်လျားသည့်ဇုန်ရှိ ကော်တီတစ်မိုက်ခရိုတီဘူလ်များအားလုံးနီးပါး ပျောက်ဆုံးသွားသည်ကို ပြသခဲ့သည် (ပုံ 6b)။ဤရလဒ်များက kumamotonic အက်ဆစ်နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာမှုများသည် ၎င်းတို့ကို နှောင့်ယှက်ရန် microtubules များပေါ်တွင် တိုက်ရိုက် သို့မဟုတ် သွယ်ဝိုက်စွာ ပြုမူကြပြီး ဤဒြပ်ပေါင်းများသည် ဆန်းသစ်သော microtubule inhibitors များဖြစ်ကြောင်း ညွှန်ပြပါသည်။
Ursonic acid နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာမှုသည် Arabidopsis thaliana ရှိ Cortical microtubules များကို ပြောင်းလဲစေသည်။(က) ဖော်ပြထားသော ပြင်းအားတွင် အမျိုးမျိုးသော urmotonic acid ဆင်းသက်လာမှုတွင် တိုင်းတာသော အမြစ်ယိုင်ထောင့်။microtubules များကို ဟန့်တားရန် သိထားသည့် ဒြပ်ပေါင်းနှစ်ခု၏ သက်ရောက်မှုများ- disopyramide နှင့် oryzalin တို့ကိုလည်း ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။inset သည် အမြစ်ကြီးထွားမှုထောင့်ကို တိုင်းတာရန် အသုံးပြုသည့် စံနှုန်းကို ပြသသည်။ကြယ်ပွင့်များသည် အတုအယောင်ကုသမှုနှင့် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ညွှန်ပြသည် (t စမ်းသပ်မှု၊ စ< 0.05)။n>19. စကေးဘား = 1 စင်တီမီတာ။(ခ) ရှည်လျားသောဇုန်ရှိ epidermal ဆဲလ်များရှိ Cortical microtubules များ။25 μM KAND 11 ရှိသော သို့မဟုတ် မရှိသော MS ပြားများပေါ်တွင် ပေါက်ရောက်သော Arabidopsis Col အမြစ်ရှိ မိုက်ခရိုတူဘူလ်များကို β-tubulin ပင်မပဋိပစ္စည်းနှင့် Alexa Fluor-conjugated ဒုတိယပဋိပစ္စည်းများကို အသုံးပြု၍ immunohistochemical အစွန်းအထင်းဖြင့် မြင်သာသည်။စကေးဘား = 10 µm ။(ဂ) အမြစ် meristem ရှိ microtubules များ၏ Mitotic ဖွဲ့စည်းပုံ။Microtubules များကို immunohistochemical staining ဖြင့် ပုံဖော်ထားပါသည်။prophase zones၊ spindles နှင့် phragmoplasts အပါအဝင် Mitotic တည်ဆောက်ပုံများကို confocal ပုံများမှ ရေတွက်ခဲ့သည်။မြှားများသည် mitotic microtubule တည်ဆောက်ပုံများကို ညွှန်ပြသည်။ကြယ်ပွင့်များသည် အတုအယောင်ကုသမှုနှင့် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ညွှန်ပြသည် (t စမ်းသပ်မှု၊ စ< 0.05)။n>9. စကေးဘား = 50 µm ။
Ursa သည် microtubule လုပ်ဆောင်ချက်ကို နှောင့်ယှက်နိုင်စွမ်းရှိသော်လည်း ၎င်း၏လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားသည် သာမန် microtubule depolymerizing အေးဂျင့်များနှင့် ကွဲပြားမည်ဟု မျှော်လင့်ရသည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ Disopyramide နှင့် oryzalin ကဲ့သို့သော microtubule depolymerizing အေးဂျင့်များ၏ ပြင်းအား မြင့်မားမှုသည် epidermal ဆဲလ်များ၏ anisotropic ချဲ့ထွင်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်၊၊ KAND 11 မပါရှိပါ။ထို့အပြင်၊ KAND 11 နှင့် disopyramide ၏တွဲဖက်အသုံးပြုမှုသည် ပေါင်းစပ် disopyramide-သွေးဆောင်သောအမြစ်ကြီးထွားမှုတုံ့ပြန်မှုကိုဖြစ်ပေါ်စေပြီး KAND 11-ဖြစ်ပေါ်စေသောကြီးထွားမှုကိုဟန့်တားခြင်းကိုလည်းတွေ့ရှိခဲ့သည် (ပုံ။ S4)။KAND 11 သို့ hypersensitive disopyramide 1-1 (phs1-1) mutant ၏ တုံ့ပြန်မှုကိုလည်း ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာထားသည်။ phs1-1 တွင် canonical မဟုတ်သော tubulin kinase point ဗီဇပြောင်းလဲမှုရှိပြီး disopyramide9,20 ဖြင့် ကုသသောအခါတွင် အမြစ်တိုစေသည်။phs1-1 တွင် KAND 11 ပါ၀င်သော agar medium တွင် စိုက်ပျိုးထားသော မျိုးပြောင်းပျိုးပင်များသည် disopyramid (ပုံ။ S5) တွင် စိုက်ပျိုးထားသော အမြစ်များနှင့် ဆင်တူသော အမြစ်တိုများရှိသည်။
ထို့အပြင်၊ KAND 11 ဖြင့် ကုသထားသော ပျိုးပင်များ၏ အမြစ် meristem တွင် prophase zones၊ spindles နှင့် phragmoplast ကဲ့သို့သော mitotic microtubule တည်ဆောက်ပုံကို ကျွန်ုပ်တို့ တွေ့ရှိခဲ့သည်။ CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS အတွက် သိသိသာသာ လျော့ကျသွားပါသည်။ mitotic microtubules အရေအတွက်ကို လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည် (ပုံ။ .6c)။
subcellular resolution တွင် KAND 11 ၏ cytotoxicity ကို လက္ခဏာရပ်ပြရန်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ဆေးရွက်ကြီး BY-2 suspension cells များကို KAND 11 ဖြင့် ကုသပြီး ၎င်းတို့၏ တုံ့ပြန်မှုကို စောင့်ကြည့်ခဲ့သည်။ကျွန်ုပ်တို့သည် KAND 11 ၏ cortical microtubules များပေါ်တွင် KAND 11 ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို အကဲဖြတ်ရန်အတွက် TagRFP-TUA6 ကိုဖော်ပြသည့် BY-2 ဆဲလ်များသို့ ပထမဆုံးထည့်သွင်းပါသည်။Cortical microtubule သိပ်သည်းဆကို cytoplasmic pixels များကြားရှိ cytoskeletal pixels ရာခိုင်နှုန်းကို တိုင်းတာသည့် ရုပ်ပုံခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။စစ်ဆေးမှုရလဒ်များက 50 μM သို့မဟုတ် 100 μM KAND 11 ကို 1 နာရီကြာ ကုသပြီးနောက်၊ သိပ်သည်းဆသည် 0.94 ± 0.74% သို့ 0.23 ± 0.28% သို့ အသီးသီး ကျဆင်းသွားကြောင်း၊ DMSO ဖြင့် ကုသသော ဆဲလ်များ၏ သိပ်သည်းဆမှာ 0.3 ± 1 ပမာဏဖြစ်သည်။ % (ပုံ။ 7a)။ဤရလဒ်များသည် KAND 11 ကုသမှုသည် cortical microtubules များ၏ depolymerization ကိုဖြစ်ပေါ်စေသည် (ပုံ။ 6b) Arabidopsis တွင် လေ့လာတွေ့ရှိချက်များနှင့် ကိုက်ညီပါသည်။KAND 11 ၏တူညီသောအာရုံစူးစိုက်မှုဖြင့်ကုသမှုပြီးနောက် GFP-ABD-တံဆိပ်တပ်ထားသော actin ချည်မျှင်များဖြင့် BY-2 လိုင်းကိုစစ်ဆေးခဲ့ပြီး KAND 11 ကုသမှုသည် actin အမျှင်များကိုနှောင့်ယှက်ကြောင်းလေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။50 μM သို့မဟုတ် 100 μM KAND 11 ဖြင့် ကုသမှုသည် 1 h တွင် actin filament သိပ်သည်းဆကို 1.20 ± 0.62% သို့ 0.61 ± 0.26% သို့ သိသိသာသာ လျှော့ချပြီး DMSO ကုသသောဆဲလ်များတွင် သိပ်သည်းဆမှာ 1.69 ± 0.2% ဖြစ်သည်။၇ခ)။ဤရလဒ်များသည် actin filaments ကိုမထိခိုက်စေသော propyzamide ၏အာနိသင်များနှင့် ဆန့်ကျင်ဘက်ဖြစ်ပြီး microtubules (SI ပုံ S6) ကိုမထိခိုက်စေသော actin depolymerizer ဖြစ်သော latrunculin B၊ထို့အပြင်၊ coumamonamide 1၊ coumamonamide acid 6 သို့မဟုတ် KAND 11 ဖြင့် ကုသမှုသည် HeLa ဆဲလ်ရှိ microtubules (SI Figure S7) ကို မထိခိုက်စေပါ။ထို့ကြောင့် KAND 11 ၏ လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားသည် လူသိများသော cytoskeleton disruptors များနှင့် ကွဲပြားသည်ဟု ယူဆရသည်။ထို့အပြင်၊ KAND 11 ဖြင့် ကုသထားသော BY-2 ဆဲလ်များ၏ အဏုကြည့်ကြည့်မှု သည် KAND 11 ကုသမှုအတွင်း ဆဲလ်သေများစတင်ခြင်းကို ထင်ရှားစေပြီး Evans အပြာရောင်စွန်းနေသောဆဲလ်သေများ၏အချိုးအစားသည် KAND 11 ကုသမှု မိနစ် 30 အပြီးတွင် သိသိသာသာတိုးမလာကြောင်းပြသခဲ့သည်၊ 50 μM သို့မဟုတ် 100 μM KAND ဖြင့် ကုသမှု မိနစ် 90 ပြီးနောက်၊ ဆဲလ်သေ အရေအတွက်သည် 43.7% သို့မဟုတ် 80.1% အသီးသီး (ပုံ. 7c) သို့ တိုးလာသည်။စုစည်းထားသော ဤအချက်အလက်များသည် ursolic အက်ဆစ်ဒြပ်စင် KAND 11 သည် ယခင်က မသိရသေးသော လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားတစ်ခုပါရှိသော အပင်ဆိုင်ရာ သီးခြား cytoskeletal inhibitor တစ်ခုဖြစ်ကြောင်း ဖော်ပြသည်။
KAND သည် Cortical microtubules၊ actin filaments နှင့် ဆေးရွက်ကြီး BY-2 ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို သက်ရောက်မှုရှိသည်။(က) TagRFP-TUA6 ၏ရှေ့မှောက်တွင် BY-2 ဆဲလ်များရှိ cortical microtubules များကိုမြင်ယောင်ခြင်း။KAND 11 (50 μM သို့မဟုတ် 100 μM) သို့မဟုတ် DMSO ဖြင့် ကုသထားသော BY-2 ဆဲလ်များကို အနုမြူစကုပ်ဖြင့် စစ်ဆေးခဲ့သည်။Cortical microtubule သိပ်သည်းဆကို သီးခြားလွတ်လပ်သောဆဲလ် 25 ခု၏ micrographs မှတွက်ချက်ခဲ့သည်။စာလုံးများသည် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ညွှန်ပြသည် (Tukey HSD စမ်းသပ်မှု၊ စ< 0.05)။စကေးဘား = 10 µm ။(ခ) GFP-ABD2 ၏ရှေ့မှောက်တွင်မြင်သာသော BY-2 ဆဲလ်များရှိ Cortical actin အမျှင်များ။KAND 11 (50 μM သို့မဟုတ် 100 μM) သို့မဟုတ် DMSO ဖြင့် ကုသထားသော BY-2 ဆဲလ်များကို အနုမြူစကုပ်ဖြင့် စစ်ဆေးခဲ့သည်။အမှီအခိုကင်းသောဆဲလ် 25 ခု၏ micrographs မှ cortical actin အမျှင်များ၏သိပ်သည်းဆကိုတွက်ချက်ခဲ့သည်။စာလုံးများသည် သိသာထင်ရှားသော ခြားနားချက်များကို ညွှန်ပြသည် (Tukey HSD စမ်းသပ်မှု၊ စ< 0.05)။စကေးဘား = 10 µm ။(ဂ) Evans အပြာရောင် စွန်းထင်းခြင်းဖြင့် သေဆုံးနေသော BY-2 ဆဲလ်များကို လေ့လာကြည့်ရှုခြင်း။KAND 11 (50 μM သို့မဟုတ် 100 μM) သို့မဟုတ် DMSO ဖြင့် ကုသထားသော BY-2 ဆဲလ်များကို တောက်ပသော အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးဖြင့် စစ်ဆေးခဲ့သည်။n=၃။စကေးဘား = 100 µm ။
သဘာဝထွက်ကုန်အသစ်များကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်းနှင့် အသုံးချခြင်းသည် ဆေးဝါးနှင့် စိုက်ပျိုးရေးအပါအဝင် လူ့ဘဝ၏ ရှုထောင့်အမျိုးမျိုးတွင် သိသာထင်ရှားသော တိုးတက်မှုများကို ဖြစ်ပေါ်စေခဲ့သည်။သဘာဝအရင်းအမြစ်များမှ အသုံးဝင်သော ဒြပ်ပေါင်းများရရှိရန် သမိုင်းဆိုင်ရာ သုတေသနကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။အထူးသဖြင့်၊ avermectin၊ ivermectin နှင့် bleomycin ၏ ခဲဒြပ်ပေါင်း 21,22 ကဲ့သို့သော နောက်ဆက်တွဲ metabolites များကို ထုတ်လုပ်နိုင်စွမ်းရှိသောကြောင့် nematodes အတွက် antiparasitic ပဋိဇီဝဆေးများအဖြစ် အသုံးဝင်သည်ဟု လူသိများသည်။အလားတူပင်၊ ပေါင်းသတ်ဆေးဒြပ်ပေါင်း အမျိုးမျိုးကို actinomycetes မှ ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့ပြီး အချို့မှာ စီးပွားဖြစ်အသုံးပြုထားပြီးဖြစ်သော 1,23 ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ အလိုရှိသောဇီဝလှုပ်ရှားမှုများနှင့်သဘာဝထုတ်ကုန်များကိုခွဲထုတ်ရန် actinomycete metabolites ကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည်ထိရောက်သောဗျူဟာတစ်ခုဖြစ်သည်ဟုယူဆသည်။ဤလေ့လာမှုတွင်၊ S. werraensis မှ coumamonamide ဒြပ်ပေါင်းအသစ်ကို တွေ့ရှိခဲ့ပြီး ၎င်းကို အောင်မြင်စွာ ပေါင်းစပ်ခဲ့သည်။Ursonic acid သည် urbenamide နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာမှု ၏ ပေါင်းစပ် အလယ်အလတ် တစ်ခု ဖြစ်သည်။၎င်းသည် ဝိသေသ အမြစ်ကောက်ကွေးခြင်းကို ဖြစ်စေနိုင်ပြီး အလယ်အလတ်မှ ပြင်းထန်သော ပေါင်းသတ်ဆေး လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြသနိုင်ပြီး အပင် microtubules များကို တိုက်ရိုက် သို့မဟုတ် သွယ်ဝိုက်၍ဖြစ်စေ ပျက်စီးစေနိုင်သည်။သို့သော်၊ KAND 11 သည် actin filaments များကို နှောင့်ယှက်ပြီး ဆဲလ်အသေများကို ဖြစ်စေသောကြောင့် urmotonic acid ၏ လုပ်ဆောင်မှု ယန္တရားသည် ရှိပြီးသား microtubule inhibitors များနှင့် ကွဲပြားနိုင်သည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် KAND 11 သည် actin filaments များကို နှောင့်ယှက်ပြီး ဆဲလ်သေခြင်းကို ဖြစ်စေကာ၊ urmotonic acid နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာမှုသည် cytoskeletal တည်ဆောက်ပုံများကို ကျယ်ပြန့်စွာ လွှမ်းမိုးနိုင်သည့် စည်းမျဉ်းစည်းကမ်း ယန္တရားတစ်ခုကို အကြံပြုထားသည်။.
urbenonic acid ၏နောက်ထပ်အသေးစိတ်လက္ခဏာရပ်များသည် urbenonic acid ၏လုပ်ဆောင်မှုယန္တရားကိုပိုမိုနားလည်ရန်ကူညီလိမ့်မည်။အထူးသဖြင့်၊ နောက်ပန်းတိုင်မှာ ursonic acid သည် လျှော့ချထားသော microtubules များနှင့် ချိတ်ဆက်နိုင်မှုစွမ်းရည်ကို အကဲဖြတ်ရန်ဖြစ်ပြီး ursonic acid နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာမှုများသည် microtubules များပေါ်တွင် တိုက်ရိုက်လုပ်ဆောင်ပြီး ၎င်းတို့ကို depolymerize ရှိ၊ သို့မဟုတ် ၎င်းတို့၏လုပ်ဆောင်ချက်သည် microtubule တည်ငြိမ်ခြင်းရှိမရှိကို ဆုံးဖြတ်ရန်ဖြစ်သည်။ထို့အပြင်၊ microtubules များသည် တိုက်ရိုက်ပစ်မှတ်မဟုတ်သည့် အခြေအနေတွင်၊ အပင်ဆဲလ်ရှိ ursonic acid ၏ မော်လီကျူးပစ်မှတ်များကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းသည် ဆက်စပ်ဒြပ်ပေါင်းများ၏ ဂုဏ်သတ္တိများနှင့် ပေါင်းသတ်ဆေးဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်ကို မြှင့်တင်ရန် ဖြစ်နိုင်သည့်နည်းလမ်းများကို ပိုမိုနားလည်ရန် ကူညီပေးပါလိမ့်မည်။ကျွန်ုပ်တို့၏ဇီဝကမ္မလုပ်ဆောင်မှုစမ်းသပ်မှုသည် Arabidopsis thaliana၊ ဆေးရွက်ကြီးနှင့် liverwort ကဲ့သို့သောအပင်များ၏ကြီးထွားမှုအပေါ် ursonic acid ၏ထူးခြားသော cytotoxic စွမ်းရည်ကိုပြသခဲ့ပြီး E. coli နှင့် HeLa ဆဲလ်များကိုမထိခိုက်စေပါ။တိရိစ္ဆာန်ဆဲလ်များအတွက် အဆိပ်သင့်မှု အနည်းငယ် သို့မဟုတ် လုံးဝမရှိခြင်းသည် ၎င်းတို့ကို ပွင့်လင်းစိုက်ပျိုးရေးနယ်ပယ်တွင် အသုံးပြုရန်အတွက် ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ် တီထွင်ပါက ursonic acid ဆင်းသက်လာမှု၏ အားသာချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။အမှန်မှာ၊ microtubules များသည် eukaryotes တွင် ဘုံဖွဲ့စည်းပုံဖြစ်သောကြောင့် အပင်များတွင် ၎င်းတို့၏ ရွေးချယ်မှုကို တားမြစ်ခြင်းသည် ပေါင်းသတ်ဆေးအတွက် အဓိကလိုအပ်ချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ propyzamide၊ tubulin နှင့်တိုက်ရိုက်ချိတ်တွဲကာ ပေါ်လီမာဖြစ်ခြင်းကို တားဆီးပေးသော microtubule depolymerizing agent သည် တိရစ္ဆာန်ဆဲလ်များအဆိပ်သင့်မှုနည်းသောကြောင့် ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ် အသုံးပြုပါသည်။disopyramide နှင့် ဆန့်ကျင်ဘက်တွင်၊ ဆက်စပ် benzamides တွင် ကွဲပြားသော ပစ်မှတ်များ ရှိသည်။အပင် microtubules အပြင် RH-4032 သို့မဟုတ် benzoxamide သည် တိရစ္ဆာန်ဆဲလ်များ သို့မဟုတ် oomycetes ၏ microtubules များကို အသီးသီး ဟန့်တားထားပြီး zalilamide သည် ၎င်း၏ phytotoxicity 25,26,27 နည်းပါးသောကြောင့် မှိုသတ်ဆေးအဖြစ် အသုံးပြုပါသည်။အသစ်တွေ့ရှိထားသောဝက်ဝံနှင့် ၎င်း၏မျိုးရိုးဗီဇများသည် အပင်များပေါ်တွင် ရွေးချယ်ထားသော cytotoxicity ကိုပြသသည်၊ သို့သော် နောက်ထပ်မွမ်းမံမှုများသည် ၎င်းတို့၏ပစ်မှတ်ကိုပြောင်းလဲစေကာ ရောဂါပိုးဖြစ်စေသောမှိုများ သို့မဟုတ် oomycetes ထိန်းချုပ်မှုအတွက် ထပ်လောင်းဆင့်ကဲဆင့်ပွားများပေးစွမ်းနိုင်သည်ကို သတိပြုသင့်သည်။
Urbenonic acid ၏ထူးခြားသောဂုဏ်သတ္တိများနှင့်၎င်း၏အဆက်အနွယ်များသည်၎င်းတို့၏ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအတွက်ပေါင်းသတ်ဆေးအဖြစ်အသုံးပြုပြီးသုတေသနကိရိယာများအဖြစ်အသုံးပြုရန်အသုံးဝင်သည်။အပင်ဆဲလ်ပုံသဏ္ဍာန်ကို ထိန်းချုပ်ရာတွင် cytoskeleton ၏အရေးပါမှုကို ကျယ်ပြန့်စွာအသိအမှတ်ပြုပါသည်။အစောပိုင်းလေ့လာမှုများက အပင်များသည် morphogenesis ကိုစနစ်တကျထိန်းချုပ်ရန်အတွက် microtubule dynamics ကိုထိန်းချုပ်ခြင်းဖြင့် cortical microtubule အဖွဲ့အစည်း၏ရှုပ်ထွေးသောယန္တရားများကိုပြောင်းလဲတိုးတက်ခဲ့ကြောင်းပြသခဲ့သည်။microtubule လုပ်ဆောင်ချက်ကို ထိန်းညှိခြင်းအတွက် တာဝန်ရှိသော မော်လီကျူးအများအပြားကို ဖော်ထုတ်ခဲ့ပြီး ဆက်စပ်သုတေသနပြုမှုများကို ဆက်လက်လုပ်ဆောင်ဆဲ ၃၊၄၊၂၈။အပင်ဆဲလ်များရှိ microtubule ဒိုင်နမစ်များကို ကျွန်ုပ်တို့၏လက်ရှိနားလည်မှုသည် cortical microtubule အဖွဲ့အစည်း၏ယန္တရားများကို အပြည့်အဝရှင်းပြခြင်းမရှိပါ။ဥပမာအားဖြင့်၊ disopyramide နှင့် oryzalin နှစ်ခုစလုံးသည် microtubules များကို depolymerize လုပ်နိုင်သော်လည်း၊ disopyramide သည် oryzalin ၏အတော်လေးအပျော့စားအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိပြီး၊ disopyramide သည် ပြင်းထန်သောအမြစ်ပုံပျက်ခြင်းကိုဖြစ်စေသည်။ထို့အပြင် microtubules များကို တည်ငြိမ်စေသော tubulin တွင် ဗီဇပြောင်းလဲမှုများသည် အမြစ်များတွင် dextrorotation ကို ဖြစ်စေသည်၊ သို့သော် microtubule ဒိုင်းနမစ်ကိုလည်း တည်ငြိမ်စေသည့် paclitaxel သည် မလုပ်ဆောင်ပါ။ထို့ကြောင့်၊ ursolic acid ၏ မော်လီကျူးပစ်မှတ်များကို လေ့လာပြီး ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းသည် အပင် cortical microtubules များ၏ စည်းမျဉ်းစည်းကမ်းဆိုင်ရာ ထိုးထွင်းသိမြင်မှုအသစ်များကို ပေးသင့်သည်။အလားတူ၊ disopyramide ကဲ့သို့ ပုံပျက်နေသော ကြီးထွားမှုကို မြှင့်တင်ရာတွင် ထိရောက်မှုရှိသော ဓာတုပစ္စည်းများနှင့် oryzalin သို့မဟုတ် kumamotoric acid ကဲ့သို့သော ထိရောက်မှုနည်းသော ဓာတုပစ္စည်းများကို နှိုင်းယှဉ်ပါက ပုံပျက်ပန်းပျက် ကြီးထွားမှု ဖြစ်ပေါ်ပုံကို သဲလွန်စပေးပါလိမ့်မည်။
အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ ကာကွယ်ရေးဆိုင်ရာ cytoskeletal ပြန်လည်ပြင်ဆင်မှုများသည် ursonic acid ၏ cytotoxicity ကိုရှင်းပြရန်နောက်ထပ်ဖြစ်နိုင်ခြေတစ်ခုဖြစ်သည်။ရောဂါပိုးဝင်ခြင်း သို့မဟုတ် အပင်ဆဲလ်များအတွင်းသို့ elicitor သွင်းခြင်းသည် တစ်ခါတစ်ရံတွင် cytoskeleton ကို ပျက်စီးစေပြီး နောက်ဆက်တွဲဆဲလ်သေများ 29.ဥပမာအားဖြင့်၊ oomycete မှရရှိသော cryptoxanthin သည် KAND ကုသမှု 30,31 နှင့် အလားတူ ဆေးရွက်ကြီးဆဲလ်သေမတိုင်မီ microtubules နှင့် actin အမျှင်များကို နှောက်ယှက်ရန် အစီရင်ခံထားပါသည်။ခုခံကာကွယ်မှုတုံ့ပြန်မှုများနှင့် cryptoxanthin ထက် ursonic acid ၏ပိုမိုမြန်ဆန်ပြီး အားကောင်းသည့်အကျိုးသက်ရောက်မှုသည် ထင်ရှားသော်လည်း၊ ၎င်းတို့သည် သာမန်ဆဲလ်လူလာဖြစ်စဉ်များကိုဖြစ်ပေါ်စေသည်ဟု ယူဆချက်ယူရန် ကျွန်ုပ်တို့အား တွန်းအားပေးခဲ့သည်။သို့သော်၊ လေ့လာမှုများအရ actin အမျှင်များ ပြတ်တောက်မှုသည် microtubule နှောင့်ယှက်မှု ၂၉ ဖြင့် အမြဲမတွဲဘဲ သူ့အလိုလို ဆဲလ်သေခြင်းကို အားပေးကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ထို့အပြင်၊ ursonic acid ဆင်းသက်လာသကဲ့သို့ ရောဂါပိုးမွှားများ သို့မဟုတ် elicitor သည် အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ပုံပျက်သွားစေခြင်း ရှိ၊ မရှိ စောင့်ကြည့်ရမည်ဖြစ်ပါသည်။ထို့ကြောင့်၊ ကာကွယ်ရေးတုံ့ပြန်မှုများနှင့် cytoskeleton တို့ကို ချိတ်ဆက်ထားသော မော်လီကျူးအသိပညာသည် ကိုင်တွယ်ဖြေရှင်းရမည့် ဆွဲဆောင်မှုတစ်ခုဖြစ်သည်။Ursonic acid နှင့် ဆက်စပ်သော မော်လီကျူး အလေးချိန် နည်းပါးသော ဒြပ်ပေါင်းများ ပါဝင်မှု နှင့် ကွဲပြားသော အာနိသင် ရှိသော ဆင်းသက်လာ အမျိုးမျိုး ကို အသုံးချခြင်းဖြင့် ၎င်းတို့သည် အမည်မသိ ဆယ်လူလာ ယန္တရားများကို ပစ်မှတ်ထားရန် အခွင့်အလမ်းများ ပေးစွမ်းနိုင်ပါသည်။
microtubule ဒိုင်းနမစ်များကို ထိန်းညှိပေးသည့် ဒြပ်ပေါင်းအသစ်များကို ရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်းနှင့် အသုံးချခြင်းသည် အပင်ဆဲလ်ပုံသဏ္ဍာန်သတ်မှတ်ခြင်းဆိုင်ရာ ရှုပ်ထွေးသော မော်လီကျူးယန္တရားများကို ဖြေရှင်းရန် အားကောင်းသောနည်းလမ်းများကို ပေးစွမ်းမည်ဖြစ်သည်။ဤအခြေအနေတွင်၊ မကြာသေးမီက တီထွင်ထားသော ဒြပ်ပေါင်းဖြစ်သော urmotonic acid သည် microtubules နှင့် actin filaments များကို ထိခိုက်စေပြီး ဆဲလ်သေခြင်းကို ဖြစ်စေသော microtubule control နှင့် အခြားသော ယန္တရားများအကြား ချိတ်ဆက်မှုကို ပုံဖော်ရန်အတွက် အခွင့်အလမ်းတစ်ခု ပေးနိုင်ပါသည်။ထို့ကြောင့်၊ urbenonic acid ကို အသုံးပြု၍ ဓာတုနှင့် ဇီဝဗေဒ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည် အပင် cytoskeleton ကို ထိန်းချုပ်သည့် မော်လီကျူး စည်းမျဉ်းများ နားလည်ရန် ကူညီပေးပါမည်။
S. werraensis MK493-CF1 ကို အစေ့အလတ် 110 mL ပါရှိသော 500 mL (w/v) galactose၊ 2% (w/v) Essence paste၊ 1% (w/v) Bacto ပါဝင်သည့် 500 mL (w/v) Bacto ပါဝင်မှု .-soyton (Thermo Fisher Scientific, Inc.), 0.5% (w/v) ပြောင်းဖူးထုတ်ယူမှု (KOGOSTCH Co., Ltd., Japan), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 နှင့် deionized water တွင် 0.2% CaCO3။(ပိုးမသတ်မီ pH 7.4)။မျိုးစေ့ယဉ်ကျေးမှုများကို 27°C တွင် rotary shaker (180 rpm) တွင် ၂ ရက်ကြာ ပေါက်ဖွားစေပါသည်။အစိုင်အခဲပြည်နယ်စော်ဖောက်ခြင်းဖြင့် စိုက်ပျိုးထုတ်လုပ်မှု။မျိုးစေ့ယဉ်ကျေးမှု (7 ml) ကို 500 ml K-1 ဘူးခွံထဲသို့ ဖိထားသောမုယောစပါး 15 ဂရမ် (MUSO Co., Ltd., Japan) နှင့် deionized water 25 g (pH ကို ချိန်ညှိမထားပါ) ပါဝင်သော ထုတ်လုပ်မှုလတ် 40 ဂရမ် ပါဝင်သော 500 ml K-1 ဘူးထဲသို့ လွှဲပြောင်းခဲ့သည်။ ပိုးမသတ်ခင်)။)စော်ဖောက်ခြင်းကို အမှောင်ထဲတွင် ၁၄ ရက်ကြာ အပူချိန် ၃၀ ဒီဂရီ စင်တီဂရိတ်တွင် ပြုလုပ်သည်။အချဉ်ဖောက်ထားသောပစ္စည်းကို 40 ml/ပုလင်း EtOH ဖြင့် ထုတ်ယူပြီး အာရုံစူးစိုက်မှု (1500 ဂရမ်၊ 4°C၊ 10 မိနစ်)။Culture supernatant (60 ml) ကို 10% MeOH/EtOAc ရောနှောပြီး ထုတ်ယူခဲ့သည်။ပြောင်းပြန်အဆင့်ကော်လံ (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120၊ 5 μm၊ ID ဖြင့် HPLC သို့ gradient elution (0-10 မိနစ်- 90%) ဖြင့် အကြွင်းအကျန် (59.5 မီလီဂရမ်) ရရှိရန် ဖိအားလျှော့နည်းသော ဖိအားအောက်တွင် အော်ဂဲနစ်အငွေ့ပျံခဲ့သည်။ 10 mm × အရှည် 250 mm) H2O/CH3CN၊ 10–35 မိနစ်: 90% H2O/CH3CN မှ 70% H2O/CH3CN (gradient), 35–45 မိနစ်: 90% H2O/EtOH, 45–155 မိနစ်: 90% H2O /EtOH မှ 100% EtOH (gradient (gradient), 155–200 min: 100% EtOH) စီးဆင်းမှုနှုန်း 1.5 ml/min တွင်၊ coumamonamide (1, 36.0 mg) ကို အဖြူရောင် amorphous အမှုန့်အဖြစ် ခွဲထားသည်။
Kumamotoamide(1);1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H)။), 4.08 (s, 3H);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3;ESI-HRMS [M+H]+- [C6H9N2O2]+ တွက်ချက်တန်ဖိုး- 141.0659၊ တိုင်းတာသည့်တန်ဖိုး- 141.0663၊ IR νmax 3451၊ 3414၊ 3173၊ 2938၊ 1603–1593၊ 1537 စင်တီမီတာ
Columbia မျိုးစေ့ (Col-0) ကို Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC) မှ သုတေသနပြုလုပ်ရန် ခွင့်ပြုချက်ဖြင့် ရယူခဲ့သည်။Col-0 အစေ့များကို ကျွန်ုပ်တို့၏ဓာတ်ခွဲခန်းအခြေအနေအောက်တွင် ဖြန့်ကျက်ထိန်းသိမ်းထားပြီး တောရိုင်းအမျိုးအစား Arabidopsis အပင်များအဖြစ် အသုံးပြုပါသည်။Arabidopsis အစေ့များကို အပေါ်ယံပိုးသတ်ပြီး သန်မာတစ်ဝက် Murashige နှင့် Skoog ကြားခံတွင် မွေးမြူထားပြီး 2% sucrose (Fujifilm Wako Pure Chemical), 0.05% (w/v) 2-(4-morpholino)ethanesulfonic acid (MES) ( Fujifilm Wako Pure Chemical)၊ )) နှင့် 1.5% agar (Fujifilm Wako Pure Chemical) ၊ pH 5.7 ၊ 23°C တွင် နှင့် အဆက်မပြတ် အလင်းရောင်။phs1-1 မျိုးပြောင်းမျိုးစေ့များကို T. Hashimoto (Nara Institute of Science and Technology) မှ ပံ့ပိုးပေးပါသည်။
SR-1 မျိုးစေ့များကို T. Hashimoto (Nara Institute of Science and Technology) မှ ထောက်ပံ့ပေးခဲ့ပြီး တောရိုင်းအမျိုးအစား ဆေးရွက်ကြီးပင်များအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။ဆေးရွက်ကြီးစေ့များကို အပေါ်ယံပိုးသတ်ပြီး ပိုးသတ်ထားသောရေတွင် သုံးညတာစိမ်ထားပြီး 2% sucrose 2% ၊ 0.05% (w/v) MES နှင့် 0.8% gellan gum (Fujifilm Wako Pure Chemical) ပါဝင်သော အစွမ်းထက်ဝက်ရှိသော ပျော်ရည်တစ်ခုတွင် ထားရှိပါ။ Murashige။နှင့် Skoog medium) pH 5.7 ဖြင့် 23°C တွင် အဆက်မပြတ် အလင်းရောင်အောက်တွင် ပေါက်ဖွားသည်။
Strain Tak-1 ကို T. Kohchi (Kyoto University) မှ ပံ့ပိုးပေးထားပြီး liverwort လေ့လာမှုအတွက် စံစမ်းသပ်ယူနစ်အဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။Gemma ကို ပိုးသတ်ထားသောအပင်များမှရရှိကာ Gamborg B5 အလတ်စား (Fujifilm Wako Pure Chemical) တွင် 1% sucrose နှင့် 0.3% gellan gum ပါ၀င်ပြီး 23°C တွင် ဆက်တိုက်အလင်းရောင်အောက်တွင် ပေါက်ဖွားသည်။
ဆေးရွက်ကြီး BY-2 ဆဲလ်များ (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2) ကို S. Hasezawa (တိုကျိုတက္ကသိုလ်) မှ ပံ့ပိုးပေးပါသည်။BY-2 ဆဲလ်များကို ပြုပြင်ထားသော Linsmeier နှင့် Skoog ကြားခံတွင် ၉၅ ဆကို ရောနှောပြီး အပတ်စဉ် 2,4-dichlorophenoxyacetic acid 32 ဖြင့် ဖြည့်စွက်ခဲ့သည်။ဆဲလ်ဆိုင်းထိန်းစနစ်ကို အမှောင်ထဲတွင် 27°C တွင် 130 rpm တွင် rotary shaker တွင် ရောစပ်ထားသည်။လတ်ဆတ်သောလတ်လတ်ဆတ်ဆတ်ပမာဏ 10 ဆဖြင့် ဆဲလ်များကိုဆေးကြောပြီး တူညီသောအလတ်စားတွင် ပြန်လည်လုပ်ဆောင်ပါ။BY-2 transgenic cell လိုင်းများသည် microtubule အမှတ်အသား TagRFP-TUA6 သို့မဟုတ် ပန်းဂေါ်ဖီရောင် mosaic virus 35S အောက်တွင် actin filament marker GFP-ABD2 ကို တည်ငြိမ်စွာဖော်ပြသော 33,34,35 တွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ထုတ်ပေးပါသည်။မူရင်း BY-2 ဆဲလ်လိုင်းအတွက် အသုံးပြုသည့် လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများအတိုင်း ဤဆဲလ်လိုင်းများကို ထိန်းသိမ်းနိုင်ပြီး ထပ်တူပြုနိုင်သည်။
HeLa ဆဲလ်များကို Dulbecco ၏မွမ်းမံထားသော Eagle's ကြားခံ (DMEM) (Life Technologies) တွင် သန္ဓေသား၏သွေးရည်ကြည် 10%၊ 1.2 U/ml ပင်နီဆီလင်၊ နှင့် 37°C incubator တွင် CO2 5% ရှိသော streptomycin 1.2 μg/ml တို့ဖြင့် ဖြည့်စွက်ထားသည်။
ဤစာမူတွင်ဖော်ပြထားသော စမ်းသပ်မှုအားလုံးကို ဂျပန်ဇီဝလုံခြုံမှုစည်းမျဉ်းများနှင့် လမ်းညွှန်ချက်များနှင့်အညီ လုပ်ဆောင်ခဲ့ပါသည်။
ဒြပ်ပေါင်းများကို dimethyl sulfoxide (DMSO; Fujifilm Wako Pure Chemical) တွင် ပျော်ဝင်ခဲ့ပြီး အသည်းwortအတွက် MS ကြားခံဆေးနှင့် Arabidopsis ဆေးရွက်ကြီး သို့မဟုတ် Gamborg B5 ကြားခံအတွက် ပျော်ဝင်ခဲ့သည်။အမြစ်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားခြင်းဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုအတွက်၊ ညွှန်ပြထားသော ဒြပ်ပေါင်းများ သို့မဟုတ် DMSO ပါရှိသော ပန်းကန်ပြားတစ်ခုလျှင် အစေ့ 10 ထက်ပို၍ ကြဲချသည်။အစေ့များကို ကြီးထွားခန်းတွင် ၇ ရက်ကြာ ပျိုးထောင်ထားသည်။ပျိုးပင်များကို ဓာတ်ပုံရိုက်ပြီး အမြစ်၏အရှည်ကို တိုင်းတာသည်။Arabidopsis အပင်ပေါက်ခြင်းဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုအတွက်၊ ပန်းကန်တစ်ချပ်လျှင် အစေ့ ၄၈ စေ့ကို 200 μM သို့မဟုတ် DMSO ပါဝင်သော ကျောက်ကပ်အလတ်တွင် ကြဲချပါသည်။Arabidopsis မျိုးစေ့များကို ကြီးထွားခန်းတွင် စိုက်ပျိုးခဲ့ပြီး အညှောက်ပေါက်သည့် ပျိုးပင်အရေအတွက် (dag) ပေါက်ပြီး 7 ရက်အကြာတွင် ရေတွက်ပါသည်။ဆေးရွက်ကြီးအထွက်နှုန်း ဆန်းစစ်ချက်အတွက် ပန်းကန်တစ်ချပ်လျှင် အစေ့ ၂၄ စေ့ကို 200 μM KAND သို့မဟုတ် DMSO ပါရှိသော ကျောက်မှုန့်ပေါ်တွင် ကြဲချပါသည်။ဆေးရွက်ကြီးအစေ့များကို ကြီးထွားခန်းတွင် စိုက်ပျိုးပြီး ၁၄ ရက်အကြာတွင် ပျိုးပင်အရေအတွက်ကို ရေတွက်သည်။liverwort ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားသည့် စစ်ဆေးမှုအတွက်၊ ပန်းကန်တစ်ခုစီမှ သန္ဓေသား ၉ ကောင်ကို KAND သို့မဟုတ် DMSO ၏ ညွှန်ပြသော ပြင်းအားများ ပါဝင်သော ကျောက်ရည်အလတ်စားပေါ်တွင် ချထားပြီး ကြီးထွားခန်းတွင် 14 ရက်ကြာ ပျိုးထားသည်။
အမြစ် meristem အဖွဲ့အစည်းကို မြင်သာစေရန် 5 mg/ml ပရောพิဒီယမ်အိုင်အိုဒိုက် (PI) ဖြင့် စွန်းထင်းနေသော ပျိုးပင်များကို အသုံးပြုပါ။PI အချက်ပြမှုများကို TCS SPE confocal laser scanning microscope (Leica Microsystems) ကို အသုံးပြု၍ fluorescence microscopy ဖြင့် စောင့်ကြည့်လေ့လာခဲ့ပါသည်။
Malami နှင့် Benfey36 တို့က ဖော်ပြထားသော ပရိုတိုကောအရ β-glucuronidase (GUS) ဖြင့် အမြစ်များ၏ Histochemical စွန်းထင်းခြင်းကို လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ပျိုးပင်များကို GUS ကြားခံရှိ 90% acetone တွင် 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic acid ဖြင့် စွန်းထင်းကာ GUS ကြားခံတွင် 1 နာရီကြာ ထားပြီး ရေဓါတ်ဖြည့်ထားသော ကလိုရယ်ဒီဟိုက်ဖြေရှင်းချက်တွင် ထည့်ထားသည်။(8 g chloral hydrate၊ ရေ 2 ml နှင့် 1 ml glycerol) နှင့် Axio Imager M1 microscope (Carl Zeiss) ကို အသုံးပြု၍ ကွဲပြားသော နှောင့်ယှက်မှု ဆန့်ကျင်ဘက် အဏုစကုပ်ဖြင့် စောင့်ကြည့်လေ့လာသည်။
ဒေါင်လိုက်ချထားသော ပန်းကန်ပြားများပေါ်တွင် စိုက်ပျိုးထားသည့် ၇ ရက်သားအရွယ် ပျိုးပင်များတွင် အမြစ်ထောင့်ကို တိုင်းတာသည်။အဆင့် 6 တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း မြေဆွဲအား vector ၏ ဦးတည်ချက်မှ အမြစ်၏ထောင့်ကို တိုင်းပါ။
ပရိုတိုကော 37 တွင် သေးငယ်သော ပြုပြင်မွမ်းမံမှုများဖြင့် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း Cortical microtubules များ၏ အစီအစဉ်ကို လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။Anti-β-tubulin antibody (KMX-1, Merk Millipore: MAB3408) နှင့် Alexa Fluor 488-conjugated anti- mouse IgG (Thermo Fisher Scientific: A32723) ကို 1:1000 နှင့် 1:100 dilutions တွင် မူလနှင့် ဒုတိယ ပဋိပစ္စည်းအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်၊ အသီးသီး။Fluorescence ပုံများကို TCS SPE confocal laser scanning microscope (Leica Microsystems) ဖြင့် ရယူထားပါသည်။Z-stack ပုံများကို ရယူပြီး ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်အရ အမြင့်ဆုံးပြင်းထန်မှု ပရောဂျက်များကို ဖန်တီးပါ။
ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်အရ HeLa ဆဲလ်ပွားခြင်းဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုအား Cell Counting Kit 8 (Dojindo) ဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
E. coli DH5α ကြီးထွားမှုကို 600 nm (OD600) တွင် spectrophotometer ကိုအသုံးပြု၍ ယဉ်ကျေးမှုရှိဆဲလ်သိပ်သည်းဆကို တိုင်းတာခြင်းဖြင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
အသွင်ပြောင်းမျိုးရိုးဗီဇ BY-2 ဆဲလ်များရှိ cytoskeletal အဖွဲ့အစည်းကို CSU-X1 confocal scanning device (Yokogawa) နှင့် sCMOS ကင်မရာ (Zyla, Andor Technology) တပ်ဆင်ထားသော fluorescence အဏုကြည့်မှန်ပြောင်းကို အသုံးပြု၍ လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။ImageJ ဆော့ဖ်ဝဲလ်ကို အသုံးပြု၍ ပုံများအတွင်း cytoplasmic pixels များကြားရှိ cytoskeletal pixels ရာခိုင်နှုန်းကို တိုင်းတာပေးသော cytoskeletal သိပ်သည်းဆကို ပုံခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းဖြင့် အကဲဖြတ်ပါသည်။
BY-2 ဆဲလ်များတွင် ဆဲလ်သေဆုံးမှုကို သိရှိရန်၊ ဆဲလ်ဆိုင်းထိန်းမှု၏ aliquot ကို အခန်းအပူချိန်တွင် 10 မိနစ်ကြာ 0.05% Evans အပြာရောင်ဖြင့် ပေါက်ဖွားခဲ့သည်။Selective Evans အပြာရောင် ဆဲလ်သေများ၏ စွန်းထင်းမှုသည် နဂိုအတိုင်း ပလာစမာ အမြှေးပါး 40 ဖြင့် ဆိုးဆေးကို ဆဲလ်များမှ ထုတ်ယူခြင်းအပေါ် မူတည်သည်။စွန်းထင်းနေသောဆဲလ်များကို တောက်ပသောအကွက်အဏုကြည့်မှန်ပြောင်း (BX53၊ Olympus) ဖြင့် လေ့လာတွေ့ရှိခဲ့သည်။
HeLa ဆဲလ်များကို 37°C နှင့် 5% CO2 တွင် 10% FBS ဖြင့် ဖြည့်စွက်ထားသည့် DMEM တွင် ကြီးထွားခဲ့သည်။ဆဲလ်များကို 100 μM KAND 11၊ kumamonamic acid 6၊ kumamonamide 1၊ 100 ng/ml colcemid (Gibco) သို့မဟုတ် 100 ng/ml Nocodmaze (Sigma) နှင့် 37°C တွင် 6 နာရီကြာ ကုသထားသည်။ဆဲလ်များကို MetOH ဖြင့် 10 မိနစ်နှင့် အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ကြာ acetate ဖြင့် ပြုပြင်ထားသည်။ပုံသေဆဲလ်များကို β-tubulin ပင်မ ပဋိပစ္စည်း (1D4A4၊ Proteintech: 66240-1) ဖြင့် ပေါက်ဖွားပြီး 0.5% BSA/PBS တွင် ၂ နာရီကြာအောင်၊ TBST ဖြင့် ၃ ကြိမ်ဆေးကြောပြီးနောက် Alexa Fluor ဆိတ် ပဋိပစ္စည်းဖြင့် ပေါက်ဖွားသည်။488 ၁ နာရီ။Mouse IgG (Thermo Fisher Scientific: A11001) နှင့် 15 ng/ml 4′၊6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 0.5% BSA/PBS တွင် ရောနှောထားသည်။TBST ဖြင့် သုံးကြိမ်ဆေးကြောပြီးနောက်တွင် စွန်းထင်းနေသောဆဲလ်များကို Nikon Eclipse Ti-E ပြောင်းပြန်အဏုကြည့်မှန်ဘီလူးပေါ်တွင် တွေ့ရှိခဲ့သည်။MetaMorph ဆော့ဖ်ဝဲ (Molecular Devices) ကို အသုံးပြု၍ အအေးခံထားသော Hamamatsu ORCA-R2 CCD ကင်မရာဖြင့် ဓာတ်ပုံများကို ရိုက်ကူးခဲ့သည်။
စာတိုက်အချိန်- ဇွန်လ 17-2024